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soso_210新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助LC-MS-MS定量問(wèn)題
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LC-MS-MS如何進(jìn)行定量分析？ 我想用LC-Q-TOF-MS 來(lái)做代謝組學(xué)，因?yàn)槭菢悠肥求w液含有多種化合物，想加入內(nèi)標(biāo)后先進(jìn)行一個(gè)相對(duì)的定量來(lái)判斷含量發(fā)生變化的化合物。所以問(wèn)題就是怎樣去定量，用總離子流圖好像不合適，因?yàn)槊總�(gè)峰對(duì)應(yīng)著很多碎片離子，對(duì)單個(gè)碎片離子進(jìn)行選擇粒子流圖積分時(shí)，峰面積明顯有變化（比如說(shuō)在總TIC圖中是一個(gè)很小的峰，選擇這個(gè)峰對(duì)應(yīng)的某個(gè)荷質(zhì)比進(jìn)行選擇粒子流圖積分時(shí)峰明顯變高），我想問(wèn)如果利用峰面積進(jìn)行相對(duì)定量的話，應(yīng)該用哪個(gè)圖比較合適？ 我聽(tīng)我們管儀器的老師說(shuō)的意思好像是要用二級(jí)質(zhì)譜圖來(lái)進(jìn)行定量，而且定量時(shí)要選擇這個(gè)物質(zhì)的特征峰來(lái)進(jìn)行定量 還有一個(gè)問(wèn)題就是定性的問(wèn)題，必須得用標(biāo)準(zhǔn)品才能定性嗎？ 在理想條件下，如果物質(zhì)分的特別開(kāi)的話，總離子流圖的每個(gè)峰是不是代表一種物質(zhì)嗎？這個(gè)峰對(duì)應(yīng)的碎片是不是，這個(gè)物質(zhì)被打成的碎片。 哎呀，好多問(wèn)題啊，我一直對(duì)也只定量定性不明白，因?yàn)槲铱次墨I(xiàn)中液質(zhì)就跑出幾個(gè)峰，為什么會(huì)檢測(cè)到幾十種物質(zhì)，不明白，麻煩各位大俠啦，求解答，萬(wàn)分感謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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soundhorizo: 金幣+5, 感謝您認(rèn)真應(yīng)助 ^^ 2012-08-10 19:58:26
soundhorizo: ACI+1 2012-08-13 21:20:40
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soundhorizo: ACI+1 2012-08-13 21:20:40
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LCMS 定量分析使用SIM 或MRM模式。公認(rèn)的MRM更為準(zhǔn)確。SIM使用Q選擇性的濾過(guò)選中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果樣品稍微復(fù)雜的話，SIM基本不合適。 MRM選擇母離子和子離子。使用Q過(guò)濾母離子，q 轟擊母離子，TOF過(guò)濾子離子，使子離子被檢測(cè)器檢測(cè)到。分子量相同，轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以，MRM模式是更為可靠的LC-MS定量分析方法。MRM檢測(cè)是離子對(duì)。 內(nèi)標(biāo)的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測(cè)化合物類似。結(jié)構(gòu)相同或類似，主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代試劑。化合物的分子量與待測(cè)物質(zhì)不重合(還需要盡量避開(kāi)化合物的isotopic peak的m/z)，基本可以和待測(cè)物質(zhì)分開(kāi)。 如果使用MRM, 樣品被分開(kāi)的話，那么理論上來(lái)說(shuō)總離子流圖上的每個(gè)峰都是代表一種物質(zhì)。同時(shí)使用MRM模式，如果樣品們的分子量與子離子不重疊，那么，即使在柱子中不被分開(kāi)的化合物，也是可以認(rèn)為在MS中被分開(kāi)了。 文獻(xiàn)報(bào)道的液質(zhì)中幾個(gè)峰，MRM檢測(cè)到幾十個(gè)物質(zhì)就是多個(gè)物質(zhì)在同一時(shí)間從色譜柱跑出來(lái)了。雖然出峰時(shí)間一樣，但是每個(gè)化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來(lái)的，只不過(guò)報(bào)道中由于篇幅有限，會(huì)被簡(jiǎn)略掉。 定性的話，需要標(biāo)品，retention time 需要一致。 定量的話，需要先作標(biāo)準(zhǔn)曲線。peak area ration vs concentration. LC-MS 方法的設(shè)立說(shuō)簡(jiǎn)單也簡(jiǎn)單，說(shuō)難也難。 具體project具體分析。 |
2樓2012-08-10 18:43:01
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問(wèn)一下您：就是定性離子和定量離子 子離子 母離子 定性離子對(duì)和定量離子對(duì) 我搞不清 1.按理說(shuō) 用質(zhì)譜掃描 找出母離子(有一個(gè)) 對(duì)其轟擊 再?gòu)钠扑榈淖与x子(有兩個(gè))片中選出比較理想的(一個(gè))來(lái)作為定性離子 2. 但是有的文章就會(huì)出現(xiàn)定性離子對(duì)和定量離子對(duì)(看了好多 我大概可以理解為子離子中被選為定量離子的就和母離子作為離子對(duì) 被選為定性離子的會(huì)和母離子作為定性離子對(duì)) 3. 但是！有篇文章中的子離子竟然兩個(gè)都是定量離子？為什么？如果說(shuō)兩個(gè)都是定量離子的話 那么定性離子呢？質(zhì)譜本身最適合做的就是定性��？ |
10樓2018-12-19 17:26:24
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