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soso_210新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助LC-MS-MS定量問題
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LC-MS-MS如何進(jìn)行定量分析？ 我想用LC-Q-TOF-MS 來做代謝組學(xué)，因?yàn)槭菢悠肥求w液含有多種化合物，想加入內(nèi)標(biāo)后先進(jìn)行一個(gè)相對(duì)的定量來判斷含量發(fā)生變化的化合物。所以問題就是怎樣去定量，用總離子流圖好像不合適，因?yàn)槊總�(gè)峰對(duì)應(yīng)著很多碎片離子，對(duì)單個(gè)碎片離子進(jìn)行選擇粒子流圖積分時(shí)，峰面積明顯有變化（比如說在總TIC圖中是一個(gè)很小的峰，選擇這個(gè)峰對(duì)應(yīng)的某個(gè)荷質(zhì)比進(jìn)行選擇粒子流圖積分時(shí)峰明顯變高），我想問如果利用峰面積進(jìn)行相對(duì)定量的話，應(yīng)該用哪個(gè)圖比較合適？ 我聽我們管儀器的老師說的意思好像是要用二級(jí)質(zhì)譜圖來進(jìn)行定量，而且定量時(shí)要選擇這個(gè)物質(zhì)的特征峰來進(jìn)行定量 還有一個(gè)問題就是定性的問題，必須得用標(biāo)準(zhǔn)品才能定性嗎？ 在理想條件下，如果物質(zhì)分的特別開的話，總離子流圖的每個(gè)峰是不是代表一種物質(zhì)嗎？這個(gè)峰對(duì)應(yīng)的碎片是不是，這個(gè)物質(zhì)被打成的碎片。 哎呀，好多問題啊，我一直對(duì)也只定量定性不明白，因?yàn)槲铱次墨I(xiàn)中液質(zhì)就跑出幾個(gè)峰，為什么會(huì)檢測(cè)到幾十種物質(zhì)，不明白，麻煩各位大俠啦，求解答，萬分感謝！ |
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4樓2012-08-13 11:45:01
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【答案】應(yīng)助回帖
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soundhorizo: 金幣+5, 感謝您認(rèn)真應(yīng)助 ^^ 2012-08-10 19:58:26
soundhorizo: ACI+1 2012-08-13 21:20:40
soundhorizo: 金幣+5, 感謝您認(rèn)真應(yīng)助 ^^ 2012-08-10 19:58:26
soundhorizo: ACI+1 2012-08-13 21:20:40
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LCMS 定量分析使用SIM 或MRM模式。公認(rèn)的MRM更為準(zhǔn)確。SIM使用Q選擇性的濾過選中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果樣品稍微復(fù)雜的話，SIM基本不合適。 MRM選擇母離子和子離子。使用Q過濾母離子，q 轟擊母離子，TOF過濾子離子，使子離子被檢測(cè)器檢測(cè)到。分子量相同，轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以，MRM模式是更為可靠的LC-MS定量分析方法。MRM檢測(cè)是離子對(duì)。 內(nèi)標(biāo)的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測(cè)化合物類似。結(jié)構(gòu)相同或類似，主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代試劑�；衔锏姆肿恿颗c待測(cè)物質(zhì)不重合(還需要盡量避開化合物的isotopic peak的m/z)，基本可以和待測(cè)物質(zhì)分開。 如果使用MRM, 樣品被分開的話，那么理論上來說總離子流圖上的每個(gè)峰都是代表一種物質(zhì)。同時(shí)使用MRM模式，如果樣品們的分子量與子離子不重疊，那么，即使在柱子中不被分開的化合物，也是可以認(rèn)為在MS中被分開了。 文獻(xiàn)報(bào)道的液質(zhì)中幾個(gè)峰，MRM檢測(cè)到幾十個(gè)物質(zhì)就是多個(gè)物質(zhì)在同一時(shí)間從色譜柱跑出來了。雖然出峰時(shí)間一樣，但是每個(gè)化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來的，只不過報(bào)道中由于篇幅有限，會(huì)被簡(jiǎn)略掉。 定性的話，需要標(biāo)品，retention time 需要一致。 定量的話，需要先作標(biāo)準(zhǔn)曲線。peak area ration vs concentration. LC-MS 方法的設(shè)立說簡(jiǎn)單也簡(jiǎn)單，說難也難。 具體project具體分析。 |
2樓2012-08-10 18:43:01
lzjessie_wlf
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