 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 7574 | 回復(fù): 28 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
求助！大腸桿菌轉(zhuǎn)化不長(zhǎng)菌落~
|
||
|
我做的是空載體的大腸桿菌轉(zhuǎn)化，然后挑單菌落提取質(zhì)粒。 現(xiàn)在已經(jīng)做了三次，但是都沒(méi)有出結(jié)果~ 材料如下： 空載體是5微升質(zhì)粒干粉加進(jìn)40微升Eluent（Eluent是Takala公司質(zhì)粒提取試劑盒中的）稀釋，初始濃度為160.5ng/μl，然后分別稀釋10倍（測(cè)試后濃度為15.0ng/μl）和100倍（7.0ng/μl，應(yīng)該是濃度太低，測(cè)得不精確）。 感受態(tài)是Takala的DH5α 具體步驟如下： 1。分別取以上三種各1μl加入到50μl感受態(tài)中，冰浴30min，用槍頭輕輕混勻。 2。在42℃中放置45s。 3。放入冰浴中2min。 4。在操作臺(tái)中加入500μlLB培養(yǎng)基無(wú)抗體。 5。在30攝氏度培養(yǎng)箱中200轉(zhuǎn)1h。 6。5000rpm/min中離心1min。 7。在無(wú)菌操作臺(tái)中取出上清液450μl，然后剩余的100μl全部涂板（Amp抗性），倒置到37℃培養(yǎng)箱中。 結(jié)果：不漲菌落。。 問(wèn)題： 是不是濃度太大的問(wèn)題，還是操作步驟有問(wèn)題，求各位指導(dǎo) [ Last edited by 1949stone on 2012-8-24 at 17:05 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有196人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 大腸桿菌轉(zhuǎn)化問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 大腸桿菌菌落形態(tài)請(qǐng)教
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 大腸桿菌轉(zhuǎn)化時(shí)出現(xiàn)異�，F(xiàn)象
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 大腸桿菌轉(zhuǎn)化求助
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 克隆基因和載體連接后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，為什么每次涂板都是空平板沒(méi)有菌落？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化PCR鑒定，沒(méi)有陽(yáng)性菌落
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌菌液，如何再擴(kuò)增？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌斜面的白色菌落？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌怎么都不長(zhǎng)啊
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌搖菌時(shí)長(zhǎng)時(shí)不長(zhǎng)
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教細(xì)菌菌落平板計(jì)數(shù)法結(jié)果不太理解
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌感受態(tài)污染問(wèn)題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教關(guān)于大腸桿菌lamda RED重組問(wèn)題
已經(jīng)有23人回復(fù)
9樓2012-08-21 14:36:01
huangguoqing
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 31 (小學(xué)生)
- 金幣: 3524.6
- 散金: 100
- 紅花: 3
- 帖子: 356
- 在線: 305.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 909932
- 注冊(cè): 2009-11-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極解答問(wèn)題 2012-08-21 16:06:27
amisking: 回帖置頂 2012-08-21 20:02:27
nongdaylf: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-08-22 20:12:57
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極解答問(wèn)題 2012-08-21 16:06:27
amisking: 回帖置頂 2012-08-21 20:02:27
nongdaylf: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-08-22 20:12:57
|
個(gè)人認(rèn)為你可以修改幾個(gè)條件 1.適當(dāng)增加點(diǎn)質(zhì)粒的量，但不要超過(guò)總體的十分之一就好； 2.DH5a感受態(tài)熱擊90s試試； 3.復(fù)蘇培養(yǎng)的時(shí)候培養(yǎng)基改成SOC會(huì)好很多； 4.這時(shí)候的菌很脆弱，最好把轉(zhuǎn)速降低點(diǎn)，之前有過(guò)同學(xué)只是放在恒溫培養(yǎng)箱里靜置就可以的； 5.離心時(shí)間可以增長(zhǎng)點(diǎn)，比如5min； 6.涂板的時(shí)候只要涂布均勻即可，不需要太長(zhǎng)時(shí)間； 7.涂布之后，最好正面朝上靜置幾分鐘，新平板就時(shí)間長(zhǎng)點(diǎn)，舊平板就時(shí)間短點(diǎn)。 個(gè)人意見(jiàn)，僅供參考！ |
2樓2012-08-21 11:54:04
tanglian8655
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 21 (小學(xué)生)
- 金幣: 1757.7
- 紅花: 3
- 帖子: 321
- 在線: 95.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1523666
- 注冊(cè): 2011-12-04
- 性別: MM
- 專業(yè): 藥物分析
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心應(yīng)助 2012-08-21 16:06:43
amisking: 回帖置頂 2012-08-21 20:02:28
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心應(yīng)助 2012-08-21 16:06:43
amisking: 回帖置頂 2012-08-21 20:02:28
|
我覺(jué)得你轉(zhuǎn)化之后，培養(yǎng)的溫度，轉(zhuǎn)速和時(shí)間都可以修改一下，可以調(diào)成37℃，250rpm培養(yǎng)2.5h，培養(yǎng)之后只需要進(jìn)行短暫離心，不需要離心那么久， 你涂好的平板最好是平放半小時(shí)使菌液充分吸收后在倒置培養(yǎng)， 42℃應(yīng)激的時(shí)間為90s。 也有可能你操作不當(dāng)，轉(zhuǎn)化效率極低造成 |
3樓2012-08-21 12:05:21
yesucao
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 3877.1
- 散金: 45
- 紅花: 6
- 帖子: 374
- 在線: 203.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 810829
- 注冊(cè): 2009-07-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極解答問(wèn)題 2012-08-21 16:07:03
amisking: 回帖置頂 2012-08-21 20:02:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極解答問(wèn)題 2012-08-21 16:07:03
amisking: 回帖置頂 2012-08-21 20:02:32
|
1、加入質(zhì)粒的時(shí)候，感受態(tài)應(yīng)該是處于冰水混合的狀態(tài)時(shí)是最好的，不要等它全融化了再加； 2、質(zhì)粒1微升的加入量有點(diǎn)少，可以適當(dāng)多加點(diǎn)，3-4微升； 3、42度熱激90s后，立即冰��； 4、大腸桿菌搖床是在37度，轉(zhuǎn)速190rpm 1h就可以了； 5、注意或許也有感受態(tài)的問(wèn)題； 6、加入的AMP的濃度是否正確； 7、涂布的時(shí)候把液體涂干，不要有水；或者涂布完后打開(kāi)蓋子一點(diǎn)，讓風(fēng)吹干，之后再37度倒置培養(yǎng)。 |
4樓2012-08-21 12:43:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +4 | 1孫悟空 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +8 | 無(wú)懈可擊的巨人 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +6 | 慕寒mio 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +9 | 負(fù)心者當(dāng)誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +10 | 小樓。 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑，材料、化工皆可 +8 | 蘇打水7777 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 152697 2026-03-12 | 4/200 |
|