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screen83新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
轉(zhuǎn)化后不長(zhǎng)菌落或不表達(dá)！
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求助各位高手： 本人將攜帶淀粉酶基因的載體通過(guò)電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入短小芽孢桿菌后，涂布新霉素抗性平板，發(fā)現(xiàn)不長(zhǎng)菌落，重新制備感受態(tài)細(xì)胞，長(zhǎng)菌落，但是不表達(dá)！質(zhì)粒是放在-80度保存的，沒(méi)導(dǎo)入大腸桿菌中，會(huì)是質(zhì)粒放置時(shí)間長(zhǎng)，失效了嗎？還是電轉(zhuǎn)設(shè)備問(wèn)題那！請(qǐng)各位蟲(chóng)友幫助想想辦法！不勝感激啊！ |
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windsor2011
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂(lè) 2012-08-23 15:50:12
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂(lè) 2012-08-23 15:50:12
首先，能幫你確認(rèn)質(zhì)粒放在-80度保存拿出來(lái)用是沒(méi)問(wèn)題的。其次，你重新制備感受態(tài)轉(zhuǎn)化前后這兩次，你都要確定你的質(zhì)粒有沒(méi)有轉(zhuǎn)進(jìn)去（和空白作對(duì)照或提質(zhì)粒）。如果轉(zhuǎn)進(jìn)去了，表達(dá)不成功，那你要看看你誘導(dǎo)表達(dá)的條件是否合適。望樓主好運(yùn) |
2樓2012-08-23 09:28:12
screen83
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2012-08-23 09:42:16
windsor2011
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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4樓2012-08-23 10:18:42
【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂(lè) 2012-08-23 15:50:27
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小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂(lè) 2012-08-23 15:50:27
| 感覺(jué)是你的質(zhì)粒沒(méi)有轉(zhuǎn)進(jìn)去。轉(zhuǎn)化的時(shí)候要同一批感受態(tài)細(xì)胞做對(duì)照的，如果對(duì)照長(zhǎng)了，轉(zhuǎn)了質(zhì)粒的沒(méi)長(zhǎng)，那就是沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去；如果兩個(gè)都沒(méi)長(zhǎng)那就是你的感受態(tài)制備的有問(wèn)題。加油 |
5樓2012-08-23 11:39:18
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