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胡亂走走2011銀蟲 (著名寫手)
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[交流]
克隆出問題了，大家?guī)兔Ψ治鱿? 已有11人參與
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| 這個(gè)基因需要做蛋白表達(dá)。6月份已經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)出來了，但是菌液忘記保種了。只得重新從頭做。但現(xiàn)在克隆出來的片段大小可以，連接轉(zhuǎn)化測序后，片段的順序卻是錯(cuò)的，中間總是少了一段，該是那個(gè)環(huán)節(jié)出問題了呢？PCR擴(kuò)增就不成功，還是連接轉(zhuǎn)化的問題？重復(fù)了兩次都是這種情況。該怎么辦呢？請大家指點(diǎn)下，謝謝。 |
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2樓2012-09-11 12:45:29
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4樓2012-09-12 16:03:16
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連接轉(zhuǎn)化測序后，片段的順序卻是錯(cuò)的，中間總是少了一段 你是怎么看出順序錯(cuò)了，測序發(fā)現(xiàn)的，還有這順序是指5‘-3’端的順序嗎？ 總的看來，模板的問題比較大，先解決這個(gè)問題咯！優(yōu)化條件把你要的基因擴(kuò)增出來后，直接拿這個(gè)產(chǎn)物測個(gè)序，如果沒有問題，在看看你的酶切位點(diǎn)有沒有弄錯(cuò)，如果沒有就可以進(jìn)行下一步了。 |
6樓2012-09-12 16:35:04
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8樓2012-09-12 18:47:27
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10樓2012-09-13 07:37:51
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