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求幫助！基因連接克隆載體后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，兩天了都沒長出菌。。。 已有6人參與
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| 我的目的基因片段回收后與克隆載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌涂板后長了兩天都沒長出菌，是感受態(tài)不好嗎？請各位大神幫我找找原因，分析一下問題出在哪里，謝謝！ |
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感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+4, 鼓勵回帖交流！ 2014-06-16 12:34:12
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轉(zhuǎn)化不長菌的原因很多。1感受態(tài)細胞不行，這個一般都是同時轉(zhuǎn)化一個已知的質(zhì)粒，如果質(zhì)粒長了，就可以排除。2轉(zhuǎn)化過程發(fā)生錯誤，同樣用質(zhì)粒做對照。3抗生素加錯了或者抗生素濃度過高。4連接不成功。轉(zhuǎn)化時連接產(chǎn)物的濃度最起碼要十幾納克，如果只有幾納克，轉(zhuǎn)化效率再低點，就不長菌了。另外如果是平末端連接的話，效率更低。 做轉(zhuǎn)化要加對照的，一個陽性一個陰性。你這樣不加對照去做，很難找到失敗的原因。 |
4樓2014-06-15 14:53:14
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Z深白色J(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-06-19 09:17:06
Z深白色J(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-06-19 09:17:06
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哎，平時多做對照就能找到原因了，轉(zhuǎn)化無非就是平板，連接產(chǎn)物沒連上，感受態(tài)有問題，建議你系統(tǒng)的做一個對照，把以上因素考慮進去就行了 仔細點說就是用實驗已有抗性的菌劃你那板，看板有沒問題（我個人覺得你板上沒長東西看你抗生素濃度加對沒？別加太高） 用一個相同抗性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)感受態(tài)，看感受態(tài)效率（自己網(wǎng)上百度，怎么算效率，要高于一定程度，做連接才比較成功） 如果以上都沒問題就是你連接到問題了 板一晚上沒長出來，如果延遲到中午還沒有就別要了，過幾天長的那都是雜菌 |
9樓2014-06-18 13:00:44
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10樓2014-06-18 14:28:12
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