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求幫助！基因連接克隆載體后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，兩天了都沒長出菌。。。 已有6人參與
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| 我的目的基因片段回收后與克隆載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌涂板后長了兩天都沒長出菌，是感受態(tài)不好嗎？請各位大神幫我找找原因，分析一下問題出在哪里，謝謝！ |
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lwk5716
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+4, 鼓勵回帖交流！ 2014-06-16 12:34:12
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轉(zhuǎn)化不長菌的原因很多。1感受態(tài)細胞不行，這個一般都是同時轉(zhuǎn)化一個已知的質(zhì)粒，如果質(zhì)粒長了，就可以排除。2轉(zhuǎn)化過程發(fā)生錯誤，同樣用質(zhì)粒做對照。3抗生素加錯了或者抗生素濃度過高。4連接不成功。轉(zhuǎn)化時連接產(chǎn)物的濃度最起碼要十幾納克，如果只有幾納克，轉(zhuǎn)化效率再低點，就不長菌了。另外如果是平末端連接的話，效率更低。 做轉(zhuǎn)化要加對照的，一個陽性一個陰性。你這樣不加對照去做，很難找到失敗的原因。 |
4樓2014-06-15 14:53:14
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