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dzxy7678鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
SYBR熒光定量擴增曲線異常
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| 擴增曲線從左到右濃度依次降低，5倍稀釋，熔解曲線中，有2個峰的是濃度最高的，請問，濃度最高的怎么跑成這樣？ |
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2012-09-14 20:05:10, 1.29 M
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atlanticwi
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 很久沒來了，辛苦 2012-09-17 16:44:39
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 很久沒來了，辛苦 2012-09-17 16:44:39
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嗯................ 補救有幾個方法： 1. 重新提，并注意洗滌步驟，乙醇洗兩次左右。如果是RNA的話，分光光度測量時注意260/230比值，不要低于1，低于1的話，鹽類雜質(zhì)太多肯定是干擾PCR進程的。 2. 做標(biāo)曲好像是可以把頭尾的誤差較大的點去掉的，多做幾個梯度，以6~7個為宜，若除去原液的其他稀釋樣品都能成線性，且斜率接近-3.32，就不要原液這個點了，用之后的6個點做標(biāo)曲，但注意，若中間有點誤差太大的話是不能去掉的。必須重做。同時你最后待測樣品也一定要落在除掉原點后的6個點的線性范圍內(nèi)。 個人看法 若有說錯請高手指點 |
4樓2012-09-16 12:36:55
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