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liu58yeying金蟲 (小有名氣)
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[求助]
提高血漿前處理回收率
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請問一下大家，我在做一個(gè)化合物的空白血漿回收率測定實(shí)驗(yàn)�，F(xiàn)在回收率竟然低到10%左右，但不知道問題出來哪里�；衔镉袃蓚�(gè)酚羥基，應(yīng)該略顯酸性，并且有一個(gè)較長的脂肪鏈，估計(jì)極性偏小。我的處理方法如下：1. 加入蛋白沉淀劑。 2. 混勻超聲。3. 13000 r/min 離心。4 取上清。5. 旋干并復(fù)溶 進(jìn)樣HPLC。 我感覺這個(gè)化合物的血漿蛋白結(jié)合率會(huì)很高吧，是在離心的這一步，化合物都被裹在下面的不溶物里面了。應(yīng)該怎樣提高回收率呢, 是不是要調(diào)整一下PH呢（比如加入低濃度的鹽酸），或者增加超聲時(shí)間？ 剛剛做代謝，請多指教啊，謝謝。 |
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還是建議試一下液液萃取，將血漿酸化，加10%的甲酸10~20ul。因?yàn)槟愕幕衔锸撬嵝缘�，調(diào)整水相PH低于化合物2~3個(gè)PH，理論上是可以提高回收率的。 |
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liu58yeying4樓2012-09-27 13:01:04
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你好啊，謝謝你的指導(dǎo)。我的師姐做過液液萃取，據(jù)她說，因?yàn)檠獫{有200ul左右，加入600 ul 乙酸乙酯，混勻后離心，導(dǎo)致兩相中間有一層白白的東西。她的回收率還沒有蛋白沉淀高。 那我請教下，看我能不能這樣改進(jìn)下： 1. 在原血漿中加入酸化的NaCl 水溶液，擴(kuò)容到600 ul， 然后再加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取。 2. 離心速率應(yīng)該是多少呢，是不是改變一下離心速率，中間的一層就不會(huì)出現(xiàn)啦？ 然后再問一下，之前我用蛋白沉淀法，加入沉淀劑后超聲，回收率有明顯提高，但我看一般的操作都沒提到超聲啊。 謝謝啊，希望得到你的指導(dǎo)。 |
3樓2012-09-21 19:16:22
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6樓2012-10-15 08:56:45
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