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敏賢豆豆新蟲 (小有名氣)
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[求助]
a-淀粉酶的酶活性測(cè)定
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| 想測(cè)定酶液的活性,自己找了一個(gè)方法測(cè),用碘液和紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)與淀粉反應(yīng)后的樣液的吸光度,然后求出濃度的方法。但是還是好多疑問(wèn),這個(gè)方法貌似要先估算酶的活力再稀釋的,但是拿到一瓶酶樣液,該怎么估計(jì)它的活力?然后稀釋多少倍去測(cè)?想問(wèn)問(wèn)大家是用什么方法測(cè)定的?有什么要注意的,麻煩詳細(xì)點(diǎn),謝謝! |
金蟲 (小有名氣)
金蟲 (正式寫手)

新蟲 (小有名氣)
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試過(guò)把酶取1ml稀釋了250倍,反應(yīng)5min后證明淀粉被反應(yīng)完了,加入碘液沒(méi)變色,但是吸光度是89%,不在文獻(xiàn)提供的濃度-吸光度的轉(zhuǎn)換表中,而且我也懷疑5min內(nèi)可能早就消耗完了加入的淀粉,如果以5min來(lái)算酶活的話,應(yīng)該不準(zhǔn)了吧?我認(rèn)為酶的濃度可以再稀釋點(diǎn),本來(lái)打算是讓它在5min內(nèi)不把所有的淀粉水解完,然后我就可以通過(guò)吸光度測(cè)得剩下淀粉的濃度,可以推算酶的活力的,但是我再?gòu)?50中取了1ml稀釋250倍,反應(yīng)了5min后加入碘液,溶液變得好黑,測(cè)了吸光度是0.2%,也不在濃度-吸光度的轉(zhuǎn)換表里查到,我郁悶了,很懷疑這種方法可不可行?我的酶是太稀了還是太濃了?要怎樣才能測(cè)出轉(zhuǎn)換表里的吸光度范圍(大概30%~50%)不知道你們?cè)趺纯础!? |
新蟲 (小有名氣)
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