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敏賢豆豆新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
a-淀粉酶的酶活性測(cè)定
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| 想測(cè)定酶液的活性，自己找了一個(gè)方法測(cè)，用碘液和紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)與淀粉反應(yīng)后的樣液的吸光度，然后求出濃度的方法。但是還是好多疑問(wèn)，這個(gè)方法貌似要先估算酶的活力再稀釋的，但是拿到一瓶酶樣液，該怎么估計(jì)它的活力？然后稀釋多少倍去測(cè)？想問(wèn)問(wèn)大家是用什么方法測(cè)定的？有什么要注意的，麻煩詳細(xì)點(diǎn)，謝謝！ |
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2樓2012-10-15 19:56:47
hippo_li
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3樓2012-10-15 23:25:46
敏賢豆豆
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試過(guò)把酶取1ml稀釋了250倍，反應(yīng)5min后證明淀粉被反應(yīng)完了，加入碘液沒(méi)變色，但是吸光度是89%，不在文獻(xiàn)提供的濃度-吸光度的轉(zhuǎn)換表中，而且我也懷疑5min內(nèi)可能早就消耗完了加入的淀粉，如果以5min來(lái)算酶活的話，應(yīng)該不準(zhǔn)了吧？我認(rèn)為酶的濃度可以再稀釋點(diǎn)，本來(lái)打算是讓它在5min內(nèi)不把所有的淀粉水解完，然后我就可以通過(guò)吸光度測(cè)得剩下淀粉的濃度，可以推算酶的活力的，但是我再?gòu)?50中取了1ml稀釋250倍，反應(yīng)了5min后加入碘液，溶液變得好黑，測(cè)了吸光度是0.2%，也不在濃度-吸光度的轉(zhuǎn)換表里查到，我郁悶了，很懷疑這種方法可不可行？我的酶是太稀了還是太濃了？要怎樣才能測(cè)出轉(zhuǎn)換表里的吸光度范圍（大概30%~50%）不知道你們?cè)趺纯�。。�? |
4樓2012-10-16 10:59:38
敏賢豆豆
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5樓2012-10-16 11:01:39
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6樓2012-10-16 11:03:16
hippo_li
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7樓2012-10-16 12:31:00
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