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杯子然金蟲 (著名寫手)
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[求助]
求木聚糖酶的測定！
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| 求教各位大俠：木聚糖酶酶活如何測定？小弟做木聚糖酶實(shí)驗(yàn)，粗酶稀釋500倍后測定得出酶活很低，請問酶活達(dá)到1000—10000以上U/ml的是如何得出來的，稀釋了多少倍？若有高手做過的我想詳細(xì)求教下？謝謝 |
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杯子然
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2樓2012-10-21 11:25:53
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 你看你買的酶制劑的包裝上關(guān)于其酶活力的定義,從中可以看出幾個(gè)關(guān)鍵的東西，該酶活測定的溫度，pH值，底物濃度等，然后按照這個(gè)去測定就可以了，每個(gè)公司的酶都有自己的特性，因?yàn)樗怯刹煌木N生產(chǎn)的，酶學(xué)性質(zhì)自然有很多的不同。如果你完全按照它酶活定義上的條件來測的話是可以測出它原來酶活的。按照問的，如果酶活有1000U,那么稀釋倍數(shù)應(yīng)該在3000——4000倍左右為佳，主要看OD差值，一般要嚴(yán)格控制在0.4-0.6之間，低于0.4.要適當(dāng)減小稀釋倍數(shù)，大于0.6要適當(dāng)增加稀釋倍數(shù)。 |
3樓2012-10-21 12:14:16
biolio2009
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4樓2012-10-22 08:51:58
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5樓2012-10-22 22:46:26
杯子然
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請問前輩，標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí)，稱取0.1g木糖，稀釋定容到100ml，分別稱取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5(ml)木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于10ml玻璃管中，用蒸餾水補(bǔ)齊2ml，再加入2mlDNS試劑，沸水5min，然后冷卻，加蒸餾水定容至10ml。請問若標(biāo)曲0.2ml木糖的OD值為0.213，而實(shí)驗(yàn)測酶活的OD值也為0.213，請問產(chǎn)生的木糖是為0.2，還是0.02，因?yàn)榍懊娌襟E里取0.2 ml木糖最后定容至10ml相當(dāng)于將木糖稀釋了10倍。 |
6樓2012-10-23 19:39:24
daiybe
金蟲 (小有名氣)
daiybe
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【答案】應(yīng)助回帖
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杯子然: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-10-24 21:46:48
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵(lì)交流 2012-10-24 21:49:21
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由你的數(shù)據(jù)可以看出，你配置的木糖濃度是1mg/ml,做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，你加0.2ml木糖溶液，然后你又加了2mlDNS，最后定容到10ml，那么，我要告訴你的是：你這10ml的體系里邊總共含有0.2mg木糖，而這個(gè)對應(yīng)的吸光度值是0.213，但是你測酶活時(shí)候讀出的反應(yīng)管中的OD也是0.213，那個(gè)可以確定的是，你這支反應(yīng)管中總的木糖含量也就是2mg。但這2mg木糖來源于兩個(gè)地方，一個(gè)是底物里邊含有的（微量），另一個(gè)是被酶降解下來的木糖，這里并不存在你說的稀釋這一說法，因?yàn)�，測酶活的過程中，一般標(biāo)準(zhǔn)曲線使用怎樣的體系，那么測定過程也用同樣的體系。比如你的測法應(yīng)該是1.8ml底物+0.2ml酶液+2mlDNS+6ml水，最后總體積為10ml，而我們平時(shí)用的是1.8ml底物溶液+0.2ml酶液+3mlDNS+10ml水，總體積為15ml，很簡單，如有不明，歡迎發(fā)郵件詳詢lrh072006@126.com |
7樓2012-10-24 20:32:20
njutjhy
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8樓2013-05-13 21:41:02
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