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杯子然金蟲 (著名寫手)
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[求助]
求木聚糖酶的測定！
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| 求教各位大俠：木聚糖酶酶活如何測定？小弟做木聚糖酶實驗，粗酶稀釋500倍后測定得出酶活很低，請問酶活達(dá)到1000—10000以上U/ml的是如何得出來的，稀釋了多少倍？若有高手做過的我想詳細(xì)求教下？謝謝 |
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rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-10-24 21:49:21
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由你的數(shù)據(jù)可以看出，你配置的木糖濃度是1mg/ml,做標(biāo)準(zhǔn)曲線時，你加0.2ml木糖溶液，然后你又加了2mlDNS，最后定容到10ml，那么，我要告訴你的是：你這10ml的體系里邊總共含有0.2mg木糖，而這個對應(yīng)的吸光度值是0.213，但是你測酶活時候讀出的反應(yīng)管中的OD也是0.213，那個可以確定的是，你這支反應(yīng)管中總的木糖含量也就是2mg。但這2mg木糖來源于兩個地方，一個是底物里邊含有的（微量），另一個是被酶降解下來的木糖，這里并不存在你說的稀釋這一說法，因為，測酶活的過程中，一般標(biāo)準(zhǔn)曲線使用怎樣的體系，那么測定過程也用同樣的體系。比如你的測法應(yīng)該是1.8ml底物+0.2ml酶液+2mlDNS+6ml水，最后總體積為10ml，而我們平時用的是1.8ml底物溶液+0.2ml酶液+3mlDNS+10ml水，總體積為15ml，很簡單，如有不明，歡迎發(fā)郵件詳詢lrh072006@126.com |
7樓2012-10-24 20:32:20
杯子然
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2樓2012-10-21 11:25:53
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| 你看你買的酶制劑的包裝上關(guān)于其酶活力的定義,從中可以看出幾個關(guān)鍵的東西，該酶活測定的溫度，pH值，底物濃度等，然后按照這個去測定就可以了，每個公司的酶都有自己的特性，因為它是由不同的菌種生產(chǎn)的，酶學(xué)性質(zhì)自然有很多的不同。如果你完全按照它酶活定義上的條件來測的話是可以測出它原來酶活的。按照問的，如果酶活有1000U,那么稀釋倍數(shù)應(yīng)該在3000——4000倍左右為佳，主要看OD差值，一般要嚴(yán)格控制在0.4-0.6之間，低于0.4.要適當(dāng)減小稀釋倍數(shù)，大于0.6要適當(dāng)增加稀釋倍數(shù)。 |
3樓2012-10-21 12:14:16
biolio2009
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