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davidsailing鐵蟲 (初入文壇)
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有關(guān)細胞計數(shù)計算的一個問題 已有1人參與
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剛開始做實驗，要用到細胞計數(shù)板，網(wǎng)上和論壇里已經(jīng)有不少關(guān)于細胞計數(shù)步驟方法的帖子，對于這些已經(jīng)不陌生了，在這里想咨詢一下各位老師有關(guān)最后細胞計數(shù)計算的一個問題： 我已經(jīng)了解到的資料： 1、細胞計數(shù)板確實有25x16和16x25的規(guī)格，25x16的計數(shù)應取為四個角+中央共5個中格來計數(shù)，16x25的應該取四個角共4個中格來計數(shù)； 2、細胞計數(shù)板上計數(shù)室的體積一般為1mmx1mmx0.1mm=0.1mm?（不考慮2mmx2mmx0.1mm這種我沒有見過的計數(shù)板規(guī)格） 3、計數(shù)時加樣一般取10μl左右，注意操作 4、計數(shù)時掌握”計上不計下，計左不計右“的原則 我查閱到和通過老師師兄們口述的計算方法（以16x25為例）： 1、以此帖為例http://www.dxy.cn/bbs/topic/6546115 （細胞懸液的細胞數(shù)）/ml＝ （ 四個格子細胞數(shù)/4) ×2×10^4 說明：公式中除以4因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。 公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1：1稀釋。 公式中乘以10^4因為計數(shù)板中每一個大格的體積為： 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm^3 而 1ml＝1000mm^3 （注：此種方法我們實驗室也在用。） 2、以此帖為例http://wenku.baidu.com/view/93d9708bd0d233d4b14e6954.html （1）16×25 ：將計數(shù)室放大，可見它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四個中方格（100個小方格）計數(shù)（見圖二）。將每一中格放大，可見25個小格。計數(shù)重復3次，取其平均值。 計數(shù)完畢后，依下列公式計算： 個數(shù)/mL=100個小方格計數(shù)/ 100 ×400×10000× 稀釋倍數(shù) （2）25×16 中央大方格以雙線等分成25個中方格，每個中方格又分成16個小方格，供細胞計數(shù)用（見圖三）。一般計數(shù)四個角和中央的五個中方格（80個小方格）的細胞數(shù)。計數(shù)重復3次，取其平均值。 計數(shù)完畢后，依下列公式計算：個數(shù)/mL=80個小方格計數(shù)/ 80 ×400×10000× 稀釋倍數(shù) 我認為第二種計數(shù)方法是比較正確的，因為畢竟要用整個計數(shù)室（0.1mm?）的細胞數(shù)來換算。如果按第一種方法是不是可以認為取了計數(shù)區(qū)四個角的細胞取平均值得到一個中格子的細胞這樣就代表了整個計數(shù)區(qū)的所有細胞量呢？這樣應該是錯誤的吧？ 我也看到有些人說，細胞計數(shù)板的計數(shù)只是一個估計，知道數(shù)量級就可以了，但是第一種方法和第二種方法相比應該可以差到一個數(shù)量級以上，應該不可以當做誤差而是錯誤了吧？ 因為沒有人來指導下究竟該怎么裁決這兩種方法，雖然是個很小的問題，但是我覺得應該明確一下，所以想請問下各位老師有什么看法？如果我在對計數(shù)板的使用根本上就有錯誤也請老師批評指正。謝謝大家。 |
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davidsailing
鐵蟲 (初入文壇)
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5樓2012-11-11 22:05:08
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