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davidsailing鐵蟲 (初入文壇)
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有關(guān)細(xì)胞計數(shù)計算的一個問題 已有1人參與
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剛開始做實驗，要用到細(xì)胞計數(shù)板，網(wǎng)上和論壇里已經(jīng)有不少關(guān)于細(xì)胞計數(shù)步驟方法的帖子，對于這些已經(jīng)不陌生了，在這里想咨詢一下各位老師有關(guān)最后細(xì)胞計數(shù)計算的一個問題： 我已經(jīng)了解到的資料： 1、細(xì)胞計數(shù)板確實有25x16和16x25的規(guī)格，25x16的計數(shù)應(yīng)取為四個角+中央共5個中格來計數(shù)，16x25的應(yīng)該取四個角共4個中格來計數(shù)； 2、細(xì)胞計數(shù)板上計數(shù)室的體積一般為1mmx1mmx0.1mm=0.1mm?（不考慮2mmx2mmx0.1mm這種我沒有見過的計數(shù)板規(guī)格） 3、計數(shù)時加樣一般取10μl左右，注意操作 4、計數(shù)時掌握”計上不計下，計左不計右“的原則 我查閱到和通過老師師兄們口述的計算方法（以16x25為例）： 1、以此帖為例http://www.dxy.cn/bbs/topic/6546115 （細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml＝ （ 四個格子細(xì)胞數(shù)/4) ×2×10^4 說明：公式中除以4因為計數(shù)了4個大格的細(xì)胞數(shù)。 公式中乘以2因為細(xì)胞懸液于染液是1：1稀釋。 公式中乘以10^4因為計數(shù)板中每一個大格的體積為： 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm^3 而 1ml＝1000mm^3 （注：此種方法我們實驗室也在用。） 2、以此帖為例http://wenku.baidu.com/view/93d9708bd0d233d4b14e6954.html （1）16×25 ：將計數(shù)室放大，可見它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四個中方格（100個小方格）計數(shù)（見圖二）。將每一中格放大，可見25個小格。計數(shù)重復(fù)3次，取其平均值。 計數(shù)完畢后，依下列公式計算： 個數(shù)/mL=100個小方格計數(shù)/ 100 ×400×10000× 稀釋倍數(shù) （2）25×16 中央大方格以雙線等分成25個中方格，每個中方格又分成16個小方格，供細(xì)胞計數(shù)用（見圖三）。一般計數(shù)四個角和中央的五個中方格（80個小方格）的細(xì)胞數(shù)。計數(shù)重復(fù)3次，取其平均值。 計數(shù)完畢后，依下列公式計算：個數(shù)/mL=80個小方格計數(shù)/ 80 ×400×10000× 稀釋倍數(shù) 我認(rèn)為第二種計數(shù)方法是比較正確的，因為畢竟要用整個計數(shù)室（0.1mm?）的細(xì)胞數(shù)來換算。如果按第一種方法是不是可以認(rèn)為取了計數(shù)區(qū)四個角的細(xì)胞取平均值得到一個中格子的細(xì)胞這樣就代表了整個計數(shù)區(qū)的所有細(xì)胞量呢？這樣應(yīng)該是錯誤的吧？ 我也看到有些人說，細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)只是一個估計，知道數(shù)量級就可以了，但是第一種方法和第二種方法相比應(yīng)該可以差到一個數(shù)量級以上，應(yīng)該不可以當(dāng)做誤差而是錯誤了吧？ 因為沒有人來指導(dǎo)下究竟該怎么裁決這兩種方法，雖然是個很小的問題，但是我覺得應(yīng)該明確一下，所以想請問下各位老師有什么看法？如果我在對計數(shù)板的使用根本上就有錯誤也請老師批評指正。謝謝大家。 |
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