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cai3110274木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
求助關(guān)于real-time PCR 內(nèi)參選擇問(wèn)題
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| 我看到很多文獻(xiàn)上說(shuō) 現(xiàn)在 國(guó)外的雜志都要求兩個(gè)或以上的內(nèi)參基因來(lái)校正，我想了解下 如果選擇兩個(gè)不同內(nèi)參，那么分析的時(shí)候以哪個(gè)為準(zhǔn)呢 還是兩個(gè)都要？還是有什么比較的方法？求解 |
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henryxue
木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cai3110274: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝您 2012-12-02 21:48:51
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cai3110274: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝您 2012-12-02 21:48:51
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我們實(shí)驗(yàn)室里所選的是biorad的實(shí)驗(yàn)和分析系統(tǒng)，軟件中可以把兩個(gè)內(nèi)參都加上然后再作圖，但貌似不能導(dǎo)入其他系統(tǒng)的數(shù)據(jù)…… 選擇不同的內(nèi)參，我所遇到的主要的情況就是細(xì)胞刺激后，內(nèi)參基因也隨之發(fā)生變化，從而導(dǎo)致內(nèi)參不再具有參考性，因此選擇多個(gè)內(nèi)參來(lái)降低這種效應(yīng)。 多內(nèi)參的選擇一定要有所區(qū)分，不要一個(gè)actin一個(gè)tubulin，這樣是沒(méi)有意義的，我在選擇內(nèi)參時(shí)，會(huì)選actin，18s rRNA以及GAPDH中的2個(gè)，主要是基于這3個(gè)內(nèi)參基因代表了細(xì)胞內(nèi)3種不同的功能。當(dāng)然你也可以去查一些文獻(xiàn)，有人專門對(duì)內(nèi)參基因的選擇做了研究。 如果有能力，還是上蛋白水平吧，除非miRNA之類的，否則realtime還是會(huì)有坑人的地方的，畢竟蛋白的半衰期、翻譯后修飾才是真正體現(xiàn)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的活性，跟RNA的水平還是會(huì)有些差異的 |
2樓2012-12-02 13:59:56
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