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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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cai3110274

木蟲 (職業(yè)作家)

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專業(yè): 微生物學(xué)

[求助] 求助關(guān)于real-time PCR 內(nèi)參選擇問題

我看到很多文獻(xiàn)上說現(xiàn)在國外的雜志都要求兩個或以上的內(nèi)參基因來校正，我想了解下如果選擇兩個不同內(nèi)參，那么分析的時候以哪個為準(zhǔn)呢還是兩個都要？還是有什么比較的方法？求解

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夫天地者萬物之逆旅

1樓 2012-12-02 10:20:32

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henryxue

木蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
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專業(yè): 免疫生物學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cai3110274: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝您 2012-12-02 21:48:51

我們實(shí)驗(yàn)室里所選的是biorad的實(shí)驗(yàn)和分析系統(tǒng)，軟件中可以把兩個內(nèi)參都加上然后再作圖，但貌似不能導(dǎo)入其他系統(tǒng)的數(shù)據(jù)……
選擇不同的內(nèi)參，我所遇到的主要的情況就是細(xì)胞刺激后，內(nèi)參基因也隨之發(fā)生變化，從而導(dǎo)致內(nèi)參不再具有參考性，因此選擇多個內(nèi)參來降低這種效應(yīng)。
多內(nèi)參的選擇一定要有所區(qū)分，不要一個actin一個tubulin，這樣是沒有意義的，我在選擇內(nèi)參時，會選actin，18s rRNA以及GAPDH中的2個，主要是基于這3個內(nèi)參基因代表了細(xì)胞內(nèi)3種不同的功能。當(dāng)然你也可以去查一些文獻(xiàn)，有人專門對內(nèi)參基因的選擇做了研究。
如果有能力，還是上蛋白水平吧，除非miRNA之類的，否則realtime還是會有坑人的地方的，畢竟蛋白的半衰期、翻譯后修飾才是真正體現(xiàn)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的活性，跟RNA的水平還是會有些差異的

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回復(fù)此樓

2樓2012-12-02 13:59:56

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