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[交流]
PCR為什么需要2條引物？
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為什么需要兩條才有特定片段出來(lái)？ 不要告訴我一條會(huì)怎么樣，我想知道為什么兩條會(huì)這樣。 |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 謝謝回答，我的問(wèn)題是為什么兩條引物就只能把他們之間序列P出來(lái)？ 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置頂 2012-12-08 18:55:23
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 謝謝回答，我的問(wèn)題是為什么兩條引物就只能把他們之間序列P出來(lái)？ 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置頂 2012-12-08 18:55:23
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兩條引物是指數(shù)擴(kuò)增，即PCR合成的新鏈可以作為下一輪PCR的模板，假設(shè)你其實(shí)模板DNA的量為a, 你PCR循環(huán)為x，那么X個(gè)循環(huán)結(jié)束后，你的目標(biāo)DNA的量為 a * 2^x(這里假設(shè)擴(kuò)增效率是2) 一條引物是線(xiàn)性擴(kuò)增，模板始終是你加入的DNA模板，而且產(chǎn)物都是單鏈的，如果還是上述條件，X個(gè)循環(huán)結(jié)束后，你的目標(biāo)DNA的量為 x*a，且為單鏈，擴(kuò)增后的得到的DNA量天壤之別 兩條引物擴(kuò)增和單引物擴(kuò)增在實(shí)際中都有應(yīng)用 當(dāng)你做克隆時(shí)，你需要雙引物擴(kuò)增，一因?yàn)槟阈枰銐蛄康腄NA，二單鏈的DNA，你克隆不上載體 當(dāng)在做測(cè)序是，就要當(dāng)引物擴(kuò)增了 |
4樓2012-12-07 22:45:07
gyesang
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11樓2012-12-08 00:46:44
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 謝謝 2012-12-08 11:34:53
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 謝謝 2012-12-08 11:34:53
分子生物學(xué)書(shū)中的任何一本均可以回答這個(gè)問(wèn)題。 我想樓主的困惑是為什么使用兩條引物的時(shí)候擴(kuò)增產(chǎn)物就會(huì)在上游——下游引物之間，而不是出了他們的范圍…… 在學(xué)習(xí)DNA相關(guān)知識(shí)時(shí)，有個(gè)單鏈結(jié)合蛋白，不知道樓主是否還有印象？ 由于單鏈會(huì)自發(fā)發(fā)生降解，酸性環(huán)境中速率更快一些，當(dāng)然雙鏈也會(huì)，但是比單鏈慢多了；這里沒(méi)有考慮可以降解DNA的各種酶的因素。 之所以最后出來(lái)的是上下游之間的序列，就是由于此范圍內(nèi)的DNA互補(bǔ)結(jié)合成了雙鏈而穩(wěn)定存在； 即使是擴(kuò)增超出了上下游的范圍，也會(huì)因?yàn)槭菃捂湥赑CR反應(yīng)體系中沒(méi)有單鏈結(jié)合蛋白的存在而自發(fā)降解。而范圍內(nèi)的雙鏈會(huì)比較穩(wěn)定地留下來(lái)。 [ Last edited by cory0931 on 2012-12-8 at 07:50 ] |
13樓2012-12-08 07:41:11
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 感謝 2012-12-08 11:35:24
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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發(fā)一個(gè)PCR原理的視頻，希望對(duì)你有幫助 http://v.youku.com/v_show/id_XMTE1MzQwODA4.html |
15樓2012-12-08 11:08:30
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 為什么一條鏈復(fù)制到另一個(gè)引物結(jié)合的區(qū)域就停止復(fù)制了呢 2012-12-07 23:32:08
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 為什么一條鏈復(fù)制到另一個(gè)引物結(jié)合的區(qū)域就停止復(fù)制了呢 2012-12-07 23:32:08
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這個(gè)問(wèn)題問(wèn)的。。。。。 DNA是有兩條反向互補(bǔ)的鏈組成，PCR時(shí)退火后，引物與模板結(jié)合，然后由5‘向3’方向合成，新合成的兩條鏈經(jīng)過(guò)退火后就形成新的DNA雙鏈分子。 去看PCR原理吧。。。一言?xún)烧Z(yǔ)解釋不清楚，去看看Kary Mullis當(dāng)年發(fā)明PCR的故事，對(duì)于你就容易理解了哈 這個(gè)百度文庫(kù)文章可能對(duì)你有用： http://wenku.baidu.com/view/08e02603cc17552707220820.html 樓主可以去試想，這兩條引物是設(shè)計(jì)在兩條鏈上的，如果設(shè)計(jì)在一條鏈上，PCR還能成功嗎？ |
7樓2012-12-07 23:14:53
8樓2012-12-07 23:32:43
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20樓2013-10-20 22:45:13
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21樓2013-10-21 09:33:19
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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22樓2015-08-28 11:02:31
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