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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » RT-PCR高手請進
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hwchen2000金蟲 (正式寫手)
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[求助]
RT-PCR高手請進
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我現(xiàn)在做RT-PCR多次，只有一次做第二鏈合成電泳后顯示有約1000bp的條帶，但是再也沒有重復出來，所以想請教一下各位高手 RNA模板約1ug 我的PCR引物是 forwards: 5'-ggatatcATGGCAGCCANAGATGCTTGTATTG-3' rewards: 5'-cccaagcttCTAGAATGCAGCACCAACGAAGGGT-3' （小寫為保護堿基） 請大俠幫我驗證這個引物的退火溫度，我現(xiàn)在是55℃ 求教了！！ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
hwchen2000: 金幣+5 2013-01-02 11:10:17
hwchen2000: 金幣+5 2013-01-02 11:10:17
| 1000bp根本不算大！第一用內參基因擴一下 ，確認模版能用，也確認你的PCR所有試劑能用。第二退火溫度用三倍GC+2倍的AT算一下，我感覺退火溫度可能太低了。第三，把你出條帶那個PCR產物再跑一下，看有沒有條帶了，如果有，看多亮，太亮的話要稀釋的。 |
hwchen20008樓2012-12-21 21:52:01
zhaodahe
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2樓2012-12-18 12:27:32
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3樓2012-12-18 12:32:59
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4樓2012-12-18 12:56:11
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