 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3893 | 回復(fù): 11 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
[求助]
目的基因連接到克隆載體后提取質(zhì)粒測(cè)序，序列有問題
|
||||
| 蟲友們幫幫忙，我以質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR，之后連接到T載體上，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，提取質(zhì)粒，雙酶切鑒定，但是幾個(gè)菌落酶切后的目的基因片段大小有點(diǎn)差別，有750bp的，有700bp左右的，還有650bp左右的。我就將這三個(gè)都拿去測(cè)序，結(jié)果750bp的是我要的序列，但是另外兩個(gè)稍微短一些的序列也是我的序列，只不過中間分別少了十幾個(gè)和二十幾個(gè)氨基酸，其它的氨基酸序列都與正確的序列是一樣的。怎么會(huì)發(fā)生這種情況呢？難道在大腸桿菌中發(fā)生剪接了，剪掉了一些氨基酸？有蟲友碰到過這種情況嗎？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 重復(fù)序列PCR擴(kuò)增 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有267人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 哪位好心人給我講講DGGE后切膠回收、連接、轉(zhuǎn)化、克隆到測(cè)序的過程？？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 我做的基因克隆，平行的幾個(gè)克隆測(cè)序后，片段比對(duì)重疊率怎么不是100%
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 我做TA克隆，準(zhǔn)備拿序列去測(cè)序。做完轉(zhuǎn)化以后直接做個(gè)菌液PCR檢驗(yàn)一下是否有目的
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 線粒體基因控制區(qū)CR含重復(fù)序列，為什么PCR產(chǎn)物直接測(cè)序不準(zhǔn)，而要純化或者克隆再測(cè)序
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化真菌后，怎么鑒定轉(zhuǎn)化子？目的基因是從該真菌克隆出來的
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 已經(jīng)克隆測(cè)序到了matK序列，如何界定？急切求助中，謝謝！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 我將1質(zhì)粒連在BK載體上，但是陽性克隆鑒定一直是陰性，什么原因呢
已經(jīng)有6人回復(fù)
- pMD18-T載體與目的基因連接后構(gòu)建的質(zhì)粒能通過接合轉(zhuǎn)移到一些難以轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 從 單克隆雜交瘤細(xì)胞 到 抗體序列（抗體測(cè)序）
已經(jīng)有24人回復(fù)
- pcr產(chǎn)物測(cè)序和克隆之后重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果一樣嗎？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 克隆基因連接到載體上測(cè)序發(fā)現(xiàn)有一個(gè)點(diǎn)突變?cè)趺崔k？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 克隆基因和載體連接后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，為什么每次涂板都是空平板沒有菌落？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】枯草-大腸穿梭質(zhì)粒pHY300PLK是克隆載體還是表達(dá)載體？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒測(cè)序測(cè)不到克隆位點(diǎn)
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】分類鑒定的時(shí)候，為什么pcr之后還要做TA克隆，轉(zhuǎn)化，然后將序列測(cè)序呢？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒跟目的基因連接不上怎么辦
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因克隆總不成功
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎樣克隆目的基因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于目的基因的克隆
已經(jīng)有12人回復(fù)
9樓2012-12-21 21:39:54
gyesang
榮譽(yù)版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +24 - MolEPI: 31
- 應(yīng)助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 散金: 1088
- 紅花: 88
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 849017
- 注冊(cè): 2009-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
首先，指出你描述問題的錯(cuò)誤的地方， “只不過中間分別少了十幾個(gè)和二十幾個(gè)氨基酸，其它的氨基酸序列都與正確的序列是一樣的�！边@里不是氨基酸序列，你描述的應(yīng)該是核苷酸序列 “難道在大腸桿菌中發(fā)生剪接了，剪掉了一些氨基酸？”這里同樣應(yīng)是核苷酸序列。 “有750bp的，有700bp左右的，還有650bp左右的”，“結(jié)果750bp的是我要的序列，但是另外兩個(gè)稍微短一些的序列也是我的序列，只不過中間分別少了十幾個(gè)和二十幾個(gè)氨基酸，其它的氨基酸序列都與正確的序列是一樣的。” 據(jù)你描述這三個(gè)質(zhì)粒應(yīng)該都是你的引物擴(kuò)增出來的，但有兩個(gè)出現(xiàn)了兩個(gè)質(zhì)粒中間缺少一段序列的情況，我覺得你的序列中可能存在重復(fù)序列，然后PCR后，會(huì)少一個(gè)重復(fù)，你分析下你的序列，看看是不是我說的這種情況，也就是找下你的序列中有沒有一段是重復(fù)序列。 |
2樓2012-12-19 23:25:09
shujunru
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 21.6
- 帖子: 30
- 在線: 18.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 2058158
- 注冊(cè): 2012-10-13
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2012-12-20 05:59:59
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2012-12-20 09:22:13
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | A child 2026-03-28 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 311（085601）求調(diào)劑 +3 | liziyeyeye 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
[考研] 0703化學(xué) +10 | 妮妮ninicgb 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+6
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 希望上岸阿小楊 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 材料 304 +15 | 荷包蛋hyj 2026-03-26 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿南師大0703化學(xué) 275求調(diào)劑 +4 | Ripcord上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +6 | kotoko_ik 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | question挽風(fēng) 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|