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ss2165銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
弱極性物質(zhì)的反相液相色譜
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| 最近從微生物代謝產(chǎn)物中分離一個(gè)弱極性物質(zhì)，只溶于石油醚、環(huán)己烷這類弱極性有機(jī)溶劑中，想做液相看下純度，用的C18反相柱，這樣用石油醚溶解進(jìn)樣可行呢？甲醇/乙腈/水洗脫，大家多多指點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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1. 確定是否有紫外吸收、最大吸收波長(zhǎng)：可以將樣品溶于環(huán)己烷中，用紫外分光光度計(jì)掃描200～400nm的紫外吸收?qǐng)D譜，先配制1mg/ml的樣品溶液，如果大于210nm有峰的紫外吸收值超過(guò)1，樣品濃度太高，稀釋樣品，直至大于210nm出現(xiàn)的峰的吸收值在0.6～0.8的范圍內(nèi)。注意測(cè)樣品前要掃描溶劑扣空白哦！ 2. 考慮樣品的溶解性是很重要的，DMSO雖然對(duì)許多物質(zhì)的溶解性很好，但是在色譜上會(huì)有很大的溶劑峰，尤其在275nm以下的吸收會(huì)很強(qiáng)，這個(gè)也是需要在色譜分離時(shí)考慮的；用正相色譜做的話，流動(dòng)相中肯定需要用到正己烷或其他溶劑，在你將樣品進(jìn)到色譜柱前，最好在燒杯中試一下，樣品溶液在你打算用的流動(dòng)相體系中是否互溶是十分重要的，以免出的峰型很差，沒(méi)有辦法解釋啥原因。 另外，提醒一下開(kāi)發(fā)正相的方法需要頻繁地更換流動(dòng)相，為了快速平衡系統(tǒng)，盡量不要用脫氣機(jī)。色譜柱用純的硅膠柱峰形可能會(huì)好一些。 以上是我開(kāi)發(fā)正相色譜法時(shí)的一些經(jīng)驗(yàn)。祝好運(yùn)！ |
4樓2013-01-07 09:49:21
2樓2012-12-29 09:39:24
zly86
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
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3樓2013-01-01 15:18:03
zhangyuhua12
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2013-01-08 14:27:44
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