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[求助] SDS-PAGE：緩沖液和蛋白樣品混合后變淺綠色？？？

兩次跑SDS-PAGE都出現(xiàn)這樣的情況：取10微升buffer（藍(lán)色，正常），加入10微升蛋白樣品，混合后，溶液變成淺綠色。跑出來(lái)的膠雖然條帶較淺，倒也正常。覺(jué)得很奇怪，有沒(méi)有高手能幫忙解釋一下。

一次樣品是黑曲霉分泌表達(dá)的木聚糖酶，一次是桔青霉分泌表達(dá)的核酸酶P1。
不知道是不是發(fā)酵體系中有什么物質(zhì)跟buffer發(fā)生作用了

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1樓 2012-12-30 16:10:17

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引用回帖:

9樓: Originally posted by heying714 at 2013-01-07 20:05:04
這種顏色變化的實(shí)質(zhì)是什么反應(yīng)呢？...

溴酚藍(lán)是一種酸堿指示劑，在酸性條件下顯黃色，隨pH升高顯藍(lán)色，變色范圍在3.0-4.6。一般的電泳條件下的緩沖液pH是中性-堿性的，所以是藍(lán)色的。你的酶液偏酸，可能落入其變色范圍。

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10樓2013-01-08 07:34:16

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heying714: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-01-06 21:16:38

你的蛋白樣品所用的緩沖液pH是多少？有的protocol里loading buffer不用緩沖液，可能會(huì)造成溴酚藍(lán)變色。

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2樓2012-12-31 06:44:58

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應(yīng)該是跟pH 有關(guān)吧

溴酚藍(lán) 有時(shí)候它自己也會(huì) 出來(lái)兩條帶啊~~~說(shuō)不定是一些不同的型體呢~~

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3樓2012-12-31 10:28:34

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3樓: Originally posted by porphybaby at 2012-12-31 10:28:34
應(yīng)該是跟pH 有關(guān)吧

溴酚藍(lán) 有時(shí)候它自己也會(huì) 出來(lái)兩條帶啊~~~說(shuō)不定是一些不同的型體呢~~

就是，還沒(méi)跑膠，混合的時(shí)候就變色了。我的酶液ph值大概是4～5

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4樓2013-01-06 21:19:05

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 06:44:58
你的蛋白樣品所用的緩沖液pH是多少？有的protocol里loading buffer不用緩沖液，可能會(huì)造成溴酚藍(lán)變色。

我的酶液ph值大概是4～5

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5樓2013-01-06 21:20:12

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引用回帖:

5樓: Originally posted by heying714 at 2013-01-06 21:20:12
我的酶液ph值大概是4～5...

一般上樣buffer的pH是6.8，和濃縮膠的pH是一致的。太酸或者太堿對(duì)變性和還原的效果都有影響�？赡苁悄愕拿敢旱膒H低，是在緩沖液里面的，所以影響用上樣buffer處理樣品的pH。一般處理樣品的時(shí)候稀釋酶液用水，然后加2×上樣buffer，你可以用100-200mM的Tris（pH6.8）稀釋酶液。

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6樓2013-01-07 02:50:48

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7樓2013-01-07 16:33:06

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7樓: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-01-07 16:33:06
樣品pH太低，你加上10ul 1M NaOH，顏色就會(huì)變回來(lái)的！一般更酸一些的還會(huì)變成黃色呢！

咦？下次試試～但是這種顏色變化到底是什么反應(yīng)呢？

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8樓2013-01-07 20:04:30

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6樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-07 02:50:48
一般上樣buffer的pH是6.8，和濃縮膠的pH是一致的。太酸或者太堿對(duì)變性和還原的效果都有影響�？赡苁悄愕拿敢旱膒H低，是在緩沖液里面的，所以影響用上樣buffer處理樣品的pH。一般處理樣品的時(shí)候稀釋酶液用水，然后加 ...

這種顏色變化的實(shí)質(zhì)是什么反應(yīng)呢？

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9樓2013-01-07 20:05:04

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