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pliu6682

木蟲 (正式寫手)

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[求助] pcr 引物二聚體出現(xiàn)是不是在酶的作用下產(chǎn)生的

各位大俠，我想驗(yàn)證自己pcr酶的活性，但只出現(xiàn)了引物二聚體，做的對(duì)照是有目的條帶p出來(lái)。我想問(wèn)，引物二聚體是在Taq酶的作用下形成的，還是自身在溫度變化時(shí)聚合形成的��？出了引物二聚體是不是說(shuō)明我的酶是沒(méi)問(wèn)題的哪？

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1樓 2012-12-31 09:09:28

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cicelyzh

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

9樓: Originally posted by pliu6682 at 2012-12-31 13:40:00
我不是用的master mix，主要是實(shí)驗(yàn)酶的效果怎么樣。一種是市面買的酶，一種是自己制備的。結(jié)果自己制備的酶只有二聚體。所以糾結(jié)要不要繼續(xù)做下去。...

你是說(shuō)用同樣的體系，買的酶可以P出來(lái)，但自己做的酶只有引物二聚體嗎？不同的酶對(duì)引物和模板濃度的要求不一樣的，也許你沒(méi)有找到最適合的條件吧。

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10樓2012-12-31 16:52:38

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cicelyzh

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
pliu6682: 金幣+1, ★有幫助, 請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有理論依據(jù)，謝謝 2012-12-31 10:31:08
pliu6682: 金幣+4, ★★★很有幫助, 還是謝謝了 2013-01-10 11:15:34

引物二聚體自身是可以聚合，在酶的作用下，可以用dNTP為底物擴(kuò)增。如果沒(méi)有聚合酶，通常PCR反應(yīng)中加入的引物量應(yīng)該很難跑膠檢測(cè)出來(lái)的。如果看到明顯的引物二聚體，DNA聚合酶應(yīng)該是起作用的。

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2樓2012-12-31 09:30:49

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 09:30:49
引物二聚體自身是可以聚合，在酶的作用下，可以用dNTP為底物擴(kuò)增。如果沒(méi)有聚合酶，通常PCR反應(yīng)中加入的引物量應(yīng)該很難跑膠檢測(cè)出來(lái)的。如果看到明顯的引物二聚體，DNA聚合酶應(yīng)該是起作用的。

如果沒(méi)有酶的話，引物二聚體是不會(huì)出現(xiàn)的，是嗎？

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3樓2012-12-31 10:29:17

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

3樓: Originally posted by pliu6682 at 2012-12-31 10:29:17
如果沒(méi)有酶的話，引物二聚體是不會(huì)出現(xiàn)的，是嗎？...

不是不會(huì)出現(xiàn)，是會(huì)形成，但量不足以觀察到。

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4樓2012-12-31 13:12:01

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