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如圖，DL1000 Marker,1為F引物，2為R引物，3和4為分別用pfu和tac酶擴(kuò)增結(jié)果，目的帶約350bp，可是除了引物帶什么也沒(méi)有啊，求大神指導(dǎo)�。�

20140427Ptrc改條件后PCR（1）.jpg

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怎知一死生為虛誕？

1樓 2014-04-29 10:28:34

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r-rainbow

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模板加了多少？你確定PCR的條件沒(méi)問(wèn)題？

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2樓2014-04-29 11:06:32

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zep616745243

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PCR條件如何，一般引物濃度高二聚體會(huì)多些，應(yīng)該不會(huì)木有目的條帶吧，搞個(gè)內(nèi)參看下是不是模板的問(wèn)題

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3樓2014-04-29 11:08:57

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引用回帖:

2樓: Originally posted by r-rainbow at 2014-04-29 11:06:32
模板加了多少？你確定PCR的條件沒(méi)問(wèn)題？

20ul體系，上來(lái)加了2ul模板，感覺(jué)多了，后來(lái)加了0.2ul，都沒(méi)有擴(kuò)增帶，PCR條件也反復(fù)試了好些，降低了退火溫度，增加了延伸時(shí)間和循環(huán)數(shù)，我也試過(guò)稀釋引物，可都沒(méi)有條帶啊。。。

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怎知一死生為虛誕？

4樓2014-04-29 11:32:17

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引用回帖:

3樓: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-29 11:08:57
PCR條件如何，一般引物濃度高二聚體會(huì)多些，應(yīng)該不會(huì)木有目的條帶吧，搞個(gè)內(nèi)參看下是不是模板的問(wèn)題

內(nèi)參的意思是

？我想試下該模版上的通用引物，可惜沒(méi)有。。。

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5樓2014-04-29 11:33:56

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zep616745243

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引用回帖:

5樓: Originally posted by 帶走云彩 at 2014-04-29 11:33:56
內(nèi)參的意思是

？我想試下該模版上的通用引物，可惜沒(méi)有。。。...

內(nèi)參就是模板上都有的指示物，如 β-actin 等，可以大致知道你的模板怎么樣

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6樓2014-04-29 11:40:57

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西門(mén)吹雪170

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帶走云彩: 金幣+2, ★有幫助 2014-05-06 19:56:09

建議引物濃度盡量保持一致，可以先用樓上的建議試試模板，再不行可以試著重新設(shè)計(jì)引物

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植根于內(nèi)心的修養(yǎng)；無(wú)需提醒的自覺(jué)；以約束為前提的自由；為別人著想的善良

7樓2014-04-29 18:17:59

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您好！看了你的說(shuō)明，你說(shuō)1，2是F，R引物？？平時(shí)我們的認(rèn)知是說(shuō)F.R分別代表前端引物和后端引物！PCR擴(kuò)增，是需要同時(shí)加入前后端引物的。另外你的3.4的變量是酶？？有加入引物嗎？？

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8樓2014-11-10 15:19:46

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