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[求助]
用簡并引物跑PCR跑不出條帶，愁死了
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最近克隆一種藥用真菌的漆酶基因，跑了四五次了，總是跑不出條帶，除了maker啥也沒有。PCR的退火溫度每次都設(shè)置了10個梯度（最高55，最低45）。 簡并引物（引物本身不知可不可行，求鑒定）： 引物1：5′-CA (C/T) TGGCA (C/T) GG (C/T) TTCTTCCA-3′ 引物2：5′-TGGCA (A/G) TGGA (A/G) GAACCACGG-3′ 加樣體系（25μL）： 2.5μL 10×PCR Buffer（Mg2+） 2.0μL dNTP Mixture 1.0μL primerL1 1.0μL primerL2 2.0μL 模板 DNA 0.2μL ETaq 16.3 ddH2O 反應(yīng)程序： 1. 94℃ 5min； 2. 94℃ 1min，50℃（有梯度，45-55） 45s，72℃ 2min，35 循環(huán)； 3. 72℃ 5min。 |
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20樓2014-01-09 18:11:16
2樓2013-04-26 09:48:48
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