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啊蟲木新蟲 (初入文壇)
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[求助]
用簡(jiǎn)并引物跑PCR跑不出條帶，愁死了
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最近克隆一種藥用真菌的漆酶基因，跑了四五次了，總是跑不出條帶，除了maker啥也沒有。PCR的退火溫度每次都設(shè)置了10個(gè)梯度（最高55，最低45）。 簡(jiǎn)并引物（引物本身不知可不可行，求鑒定）： 引物1：5′-CA (C/T) TGGCA (C/T) GG (C/T) TTCTTCCA-3′ 引物2：5′-TGGCA (A/G) TGGA (A/G) GAACCACGG-3′ 加樣體系（25μL）： 2.5μL 10×PCR Buffer（Mg2+） 2.0μL dNTP Mixture 1.0μL primerL1 1.0μL primerL2 2.0μL 模板 DNA 0.2μL ETaq 16.3 ddH2O 反應(yīng)程序： 1. 94℃ 5min； 2. 94℃ 1min，50℃（有梯度，45-55） 45s，72℃ 2min，35 循環(huán)； 3. 72℃ 5min。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
啊蟲木(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-04-29 14:02:34
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
啊蟲木(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-04-29 14:02:34
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用什么軟件設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物的？ 最近我用icodehop設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物跑出了目的片段了。 25μl 反應(yīng)體系：10×buffer 2.5 μl dNTP 0.5 μl 引物1 1.0μl 引物2 1.0 μl cDNA 1.0μl Taq酶 0.5μl ddH2O ~~ 反應(yīng)參數(shù)：采用Touchdown |
9樓2013-04-26 23:49:51
2樓2013-04-26 09:48:48
啊蟲木
新蟲 (初入文壇)
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3樓2013-04-26 09:53:28
德國(guó)工兵鏟
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4樓2013-04-26 10:06:20
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