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jasminezhao金蟲 (小有名氣)
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[求助]
DNA測序問題
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| 最近在做重組子的構(gòu)建，可是做完轉(zhuǎn)化后，提取的質(zhì)粒為什么濃度很低只有幾十ng/ui，這個是什么原因跟跳的單克隆菌落的大小有關(guān)系嗎？還有就是送去測序?yàn)槭裁吹玫降男蛄薪Y(jié)果非常少只有三四百個bp，這是什么原因？希望大家能給寶貴意見，都做了三四個月了還是無結(jié)果，真的急瘋了，謝謝各位了！！ |
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jasminezhao
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9樓2013-01-05 10:03:46
xingxingsf
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2013-01-05 17:38:24
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做完轉(zhuǎn)化的平板上長出的菌落是很小，所以要先劃到新的平板上養(yǎng)一夜，長多點(diǎn)再提質(zhì)粒，理論上即使挑很小的菌落在液體LB培養(yǎng)基里養(yǎng)一夜也能長到10的9次方左右了，足夠提質(zhì)粒了。你很少的原因可能是轉(zhuǎn)化效率低，重組質(zhì)粒沒轉(zhuǎn)進(jìn)去？ 測序一個反應(yīng)就400bp左右，你的片段長的話可以要求公司測通，再拼接起來就行了。 |
2樓2013-01-04 21:13:43
Haibara_Ai
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3樓2013-01-05 03:42:48
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【答案】應(yīng)助回帖
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你用的手提質(zhì)粒還是盒子提？如果的低拷貝質(zhì)粒，盒子提就是幾十ng/ul。如果希望濃度高就多搖些菌。挑很小的克隆搖菌過夜提質(zhì)粒也足夠的。 高質(zhì)量的測序一個反應(yīng)可以讀600-700nt，但是后面的分辨率也不是很好，400nt是正常的。當(dāng)然，如果模板質(zhì)量高，測序出來的結(jié)果會更漂亮，讀出來的也稍微長一點(diǎn)。但也不會超過我說的那個數(shù)目了。如果你的序列長，需要多個引物測，再把序列拼接起來。 |
4樓2013-01-05 08:57:31
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