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zhangxiashin新蟲 (初入文壇)
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[交流]
基因全長及表達(dá) 已有1人參與
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親們,目前得到某蛋白基因的兩個(gè)片段,一個(gè)是1-1300,另外一個(gè)是1200-1800,請問如何用重疊pcr連接在一起,從而獲取全長呢,求具體的指點(diǎn)。 得到全長(從ATG到3’末端)后必須做5‘RACE嗎才能進(jìn)行表達(dá)嗎?我目的是能表達(dá)出有酶活性的蛋白,謝謝親們 |
新蟲 (初入文壇)
新蟲 (初入文壇)
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你的真菌基因組測序了嗎?如果測序了,直接在基因組數(shù)據(jù)庫中找cds,如果沒測序,需要以你這段ORF為基礎(chǔ),進(jìn)行5‘RACE 3’RACE,確定再找不出更大ORF,如此,你找到的ORF才是CDS. 關(guān)于overlap pcr,A下游與B上后引物沒必要有重疊部分,但是A與B一定要有20bp以上overlap,這樣再用CDS全長設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增便可。 希望對你有用。 |
新蟲 (初入文壇)
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