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zhangxiashin新蟲 (初入文壇)
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[交流]
基因全長及表達(dá) 已有1人參與
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親們，目前得到某蛋白基因的兩個(gè)片段，一個(gè)是1-1300，另外一個(gè)是1200-1800，請問如何用重疊pcr連接在一起，從而獲取全長呢，求具體的指點(diǎn)。 得到全長（從ATG到3’末端）后必須做5‘RACE嗎才能進(jìn)行表達(dá)嗎？我目的是能表達(dá)出有酶活性的蛋白，謝謝親們 |
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2樓2013-01-05 09:41:47
zhangxiashin
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3樓2013-01-05 10:52:29
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4樓2013-01-05 10:54:40
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-01-07 16:32:26
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-01-07 16:32:26
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你的真菌基因組測序了嗎?如果測序了，直接在基因組數(shù)據(jù)庫中找cds，如果沒測序，需要以你這段ORF為基礎(chǔ)，進(jìn)行5‘RACE 3’RACE,確定再找不出更大ORF,如此，你找到的ORF才是CDS. 關(guān)于overlap pcr，A下游與B上后引物沒必要有重疊部分，但是A與B一定要有20bp以上overlap，這樣再用CDS全長設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增便可。 希望對你有用。 |
5樓2013-01-07 13:21:35
zhangxiashin
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6樓2013-01-07 16:32:30
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7樓2013-01-07 16:37:38
8樓2013-01-10 11:15:53
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