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[求助]
關(guān)于鎳柱純化，急求，！！
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真是太怪異了。 我用大腸桿菌表達(dá)了一個(gè)可溶性蛋白，經(jīng)質(zhì)粒測序，序列都是沒問題的，，這個(gè)可溶性蛋白我用鎳柱純化，，細(xì)菌破碎后，，上清液我過鎳柱，，經(jīng)過淋洗后用高濃度咪唑洗脫，洗脫下來后濃縮，，然后SDS-PAGE檢測，，發(fā)現(xiàn) 沒有我的目的蛋白，而是大腸桿菌自身蛋白，，這是怎么回事？ 這個(gè)情況我碰到兩次了，，上次一個(gè)蛋白也是這種情況，，用鎳柱純化的蛋白不是我的目的蛋白，，，真是怪異，，急求�。�！ |
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2樓2013-01-05 22:06:09
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前面的那位說的不錯(cuò)！ 你這個(gè)目的是不是真的有表達(dá)，你也沒有驗(yàn)證！序列正確是一方面，你還是要看誘導(dǎo)表達(dá)之后，sds-page檢測一下是否有你的目的蛋白表達(dá)！ 其二，很可能你的破菌上清中就沒有目的蛋白！目的蛋白在你的破菌沉淀中！可能原因有可能是選擇的buffer pH不合適，或者破菌條件需要調(diào)整，或者你的目的蛋白本身就包涵體表達(dá)！ |
5樓2013-01-06 08:48:42
zhang881007
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7樓2013-01-06 10:34:19
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10樓2013-01-07 13:52:33
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