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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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hjhjhj6

金蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] RNA降解，求高人分析一下原因。

新手，提的斑馬魚肝臟和卵巢的RNA，takara的trizol，操作應(yīng)該問(wèn)題不大，槍頭都是無(wú)RNA酶的。取樣是新鮮樣，20mg左右，1mltrizol，液氮和勻漿器法都試過(guò)，電泳圖都差不多，5s條帶特別亮。電泳液是TAE，DEPC水配置，找了很多原因，該注意的感覺(jué)都注意到了，DEPC處理什么的，但依然降解。氯仿、異丙醇沒(méi)預(yù)冷，乙醇是-4度保存的，這個(gè)有影響嗎？跟著別人的一起做也降解，別人的還好，是不是組織快還需要再小一點(diǎn)？
希望大家交流一下經(jīng)驗(yàn)，一開(kāi)始也提不好，后來(lái)把問(wèn)題解決了的朋友說(shuō)說(shuō)問(wèn)題出在哪里，供我參考。謝謝！
IM001245.Tif(2.66MB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DTfp.pPqUAQA570?p=130497

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HakunaMatata~

1樓 2013-01-07 17:27:00

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yesali

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【答案】應(yīng)助回帖

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hjhjhj6: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 我現(xiàn)在做的好一些了，我覺(jué)得是跑膠的問(wèn)題，正在改進(jìn)中。 2013-01-14 20:37:59
hjhjhj6: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-01-15 17:43:55

最有可能是：1、你稀釋RNA的DEPC水出問(wèn)題，RNA被降解；2、電泳液出問(wèn)題了，RNA在電泳過(guò)程中被降解

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5樓2013-01-11 14:44:16

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616057157

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hjhjhj6: 金幣+3, ★有幫助 2013-01-14 20:43:44
hjhjhj6: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-01-15 17:44:09

親，你在提取過(guò)程中要4度離心，且操作越快越好。你也要注意細(xì)胞數(shù)目和Trizol試劑的比列，裂解徹底，提取的RNA條帶才好。

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不曾擁有何談失去，不必傷心�。�！

2樓2013-01-08 08:25:22

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hjhjhj6

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2樓: Originally posted by 616057157 at 2013-01-08 08:25:22
親，你在提取過(guò)程中要4度離心，且操作越快越好。你也要注意細(xì)胞數(shù)目和Trizol試劑的比列，裂解徹底，提取的RNA條帶才好。

謝謝但這些都注意了啊。。。組織相對(duì)來(lái)說(shuō)已經(jīng)很小很小了會(huì)不會(huì)是DEPC水的問(wèn)題？我水都是自己配置的不是買的現(xiàn)成的

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HakunaMatata~

3樓2013-01-08 11:06:00

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言默haha

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hjhjhj6: 金幣+5, ★★★很有幫助, 嗯，我換了下水，感覺(jué)好一些 2013-01-14 20:36:56
hjhjhj6: 金幣+5 2013-01-15 17:44:21

你應(yīng)該檢查一下使用水的質(zhì)量可能水已經(jīng)污染了

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4樓2013-01-11 10:57:54

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hjhjhj6: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-01-15 17:44:40

提RNA是挺難弄得，但是如果嚴(yán)格按照說(shuō)明書就是沒(méi)有問(wèn)題的。
首先你樣品研磨后一定要馬上加上trizon
臺(tái)子也要過(guò)夜照
最好用專用的工作臺(tái)
整個(gè)過(guò)程要快就行了

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可以朝九晚五，也能浪跡天涯

6樓2013-01-11 15:59:49

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5樓: Originally posted by yesali at 2013-01-11 14:44:16
最有可能是：1、你稀釋RNA的DEPC水出問(wèn)題，RNA被降解；2、電泳液出問(wèn)題了，RNA在電泳過(guò)程中被降解

我發(fā)現(xiàn)提的RNA跑膠出來(lái)差別很大，本來(lái)跑出來(lái)只有一條帶的，再跑一次又變好了；本來(lái)5S條帶很亮的，第二次跑結(jié)果又很好，但跑出好結(jié)果的情況不太穩(wěn)定。電泳緩沖液是DEPC水配的，配膠是0.56g+40mlTAE，大概1.5%，147v跑了10分鐘，問(wèn)題出在哪呢？

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7樓2013-01-14 20:41:56

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這有可能是跑膠的過(guò)程中降解了，有可能是點(diǎn)樣的過(guò)程中混進(jìn)RNA酶了，總之，跑膠的環(huán)節(jié)也要盡量的注意

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8樓2013-01-14 21:03:46

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8樓: Originally posted by 追夢(mèng)的人1987 at 2013-01-14 21:03:46
這有可能是跑膠的過(guò)程中降解了，有可能是點(diǎn)樣的過(guò)程中混進(jìn)RNA酶了，總之，跑膠的環(huán)節(jié)也要盡量的注意

點(diǎn)樣過(guò)程中混入RNA酶的可能性大不？是不是Loading Buffer不太好？
還是膠的問(wèn)題？

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HakunaMatata~

9樓2013-01-15 09:54:34

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追夢(mèng)的人1987

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9樓: Originally posted by hjhjhj6 at 2013-01-15 09:54:34
點(diǎn)樣過(guò)程中混入RNA酶的可能性大不？是不是Loading Buffer不太好？
還是膠的問(wèn)題？...

也有可能的，loadingbuffer盡量單獨(dú)用，和跑DNA的分開(kāi)，buffer與RNA混合時(shí)，在無(wú)RNA酶的小pcr管里混合，還有就是整個(gè)過(guò)程要快，這樣會(huì)好點(diǎn)

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10樓2013-01-15 14:03:49

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