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[求助]
如何利用基因組DNA進行real time PCR ？？？？
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求助利用基因組DNA進行real-time PCR的相關問題。急急急急急�。�！ 我先介紹下試驗設計：最近想要進行一個實驗，是對基因組DNA進行葡萄糖基化修飾，然后利用內切酶進行酶切，在酶切位點的兩端設計引物，并進行real-time PCR。如果內切酶識別的酶切位點被修飾了，則切不斷；反之，沒被修飾的能夠切斷。這樣在酶切位點兩端設計引物，進行real-time PCR，如果有擴增的片段，就證明酶切位點被修飾了，因為修飾的位點不能被切斷；反之，沒有擴增片段就證明這個位點沒有被修飾。real-time PCR的結果就能體現(xiàn)修飾后，基因組DNA上酶切位點的修飾程度。 我現(xiàn)在有幾個問題： 1.之前都是用mRNA進行逆轉錄PCR，然后用cDNA做模板進行real-time PCR，為了看基因的表達，這類real-time PCR可以選用GAPDH或者18S做內參。沒做過用基因組DNA做模板進行real-time PCR。如果用基因組DNA做模板進行real-time PCR的話，應該選用什么做內參？ 2.如果用相對定量法進行實驗組與對照組之間的比較，可以用2-△△CT法嗎？ 3.如果不能用2-△△CT法，用什么方法檢測實驗組與對照組的差別。 還望各位，不吝賜教。 |
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ccharlien
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amisking: 金幣+3, MolEPI+1, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-10 20:28:21
ada800515: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝 2013-01-14 09:57:25
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以前做過SNP位點的RFLP，和你的設計差不多，不過只要PCR--酶切--電泳,就可以看到結果 你的設計是基因組--處理--酶切--Realtime PCR，是這個意思么？ 如果酶切之后可以電泳看到條帶差別也就別做定量PCR了，多說明不了什么問題 我覺得如果要做的話，開始試驗時設計一個管家基因比如GAPDH和一個你這個基因的其他片斷做對照就行了 |
2樓2013-01-10 17:52:50
ccharlien
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5樓2013-01-11 17:49:41
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