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yll232鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
含高級(jí)結(jié)構(gòu)的質(zhì)粒PCR
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| 我們通過(guò)T4連接酶將兩個(gè)片段連接一個(gè)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化后涂板，挑取一個(gè)菌落培養(yǎng)后將菌液送測(cè)序，返回結(jié)果說(shuō)有高級(jí)結(jié)構(gòu)，我想問(wèn)一下所謂的高級(jí)結(jié)構(gòu)影響我對(duì)這個(gè)質(zhì)粒PCR嗎？謝謝了 |
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yll232
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2013-01-15 15:02:38
cicelyzh
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2樓2013-01-15 09:42:18
yesali
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-01-15 11:51:33
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-01-15 11:51:33
| 測(cè)序說(shuō)的高級(jí)結(jié)構(gòu)可能是GC含量高，或者是序列中單堿基重復(fù)多次（如連續(xù)10個(gè)T），這樣會(huì)導(dǎo)致測(cè)序測(cè)不通。至于PCR，不知道你的目的片段有多大，如果小于1000bp的話(huà)，先用普通的Taq酶和普通buffer做一次，看看結(jié)果。如果不理想的話(huà)，改用GCbuffer做，應(yīng)該不會(huì)有大問(wèn)題的。 |
3樓2013-01-15 09:53:17
yll232
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4樓2013-01-15 15:01:02
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