 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4091 | 回復(fù): 24 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
senlinpeiyu銅蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
植物山茶過(guò)氧化氫酶（CAT）活性測(cè)定問(wèn)題 已有2人參與
|
|||
|
1、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性測(cè)定 （1）試劑配制： A母液：0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液: 取Na2HPO4•12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液：取NaH2PO4•2H2O（分子量156.01）31.2g。 分別用蒸餾水定容到1000ml。 0.15mol/L磷酸緩沖液（PBS，pH7.0）：取A母液(Na2HPO4) 457.5 ml 和B母液(NaH2PO4) 292.5 ml混合后用蒸餾水定容至1000ml。 （2）反應(yīng)液配制：取200ml PBS（0.15M，pH7.0），加入0.3092ml 30%的H2O2（原液）搖勻即可。 （3）酶液制備：取0.1g（因?yàn)槿~片非常少，取了0.1g的樣）葉片，洗凈后置于預(yù)冷的研缽中，加入1.6ml 50mmol/L預(yù)冷的磷酸緩沖液（pH7.8）在冰浴上研磨成勻漿，轉(zhuǎn)入離心管中在4℃、12000g下離心20min，上清液即為酶液。酶液提取出來(lái)后，當(dāng)天沒(méi)有測(cè)定，于是把酶液保存在4度冰箱里面。 （4）樣品測(cè)定：取3ml反應(yīng)液加入50ul 山茶酶液，以PBS為對(duì)照調(diào)零，測(cè)定OD240（紫外）（測(cè)定40s）。 （5）酶活性計(jì)算：以每min OD值減少0.01為1個(gè)酶活性單位（u）。 CAT=[ΔA240×Vt ]/（W×Vs×0.01×t） (u/g min) ΔA240：為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化；W為樣品鮮重(g)；t為反應(yīng)時(shí)間(min)；Vt為提取酶液總體積（ml， 1.6ml）；Vs為測(cè)定時(shí)取用酶液體積（ml, 0.1ml）。 用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，石英比色皿，測(cè)定的時(shí)候用緩沖液做空白調(diào)零。然后測(cè)的時(shí)候，先加反應(yīng)液3ml，再加酶液0.1ml，搖勻。然后計(jì)時(shí)，測(cè)定吸光度的減小情況。本來(lái)測(cè)定的數(shù)據(jù)應(yīng)該是減小的，0s時(shí)吸光度最大，40s時(shí)吸光度最小，呈下降趨勢(shì)。但結(jié)果我測(cè)出來(lái)數(shù)據(jù)一直增大，這是為什么呢？是藥品的問(wèn)題，還是這個(gè)方法不適合測(cè)定山茶的過(guò)氧化氫酶的活性，還是其他的問(wèn)題。 請(qǐng)大俠賜教！�。》浅７浅８兄x�。�！ [ Last edited by senlinpeiyu on 2013-1-23 at 16:55 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 科研資源 |
» 猜你喜歡
江蘇省優(yōu)青門(mén)檻
已經(jīng)有20人回復(fù)
-
心好累。今年我們部門(mén)提交了18個(gè)項(xiàng)目。中了11了，可惜我的又掛了
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
植物學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有125人回復(fù)
-
面上項(xiàng)目計(jì)劃書(shū)
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
面上項(xiàng)目計(jì)劃書(shū)附件
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
面上項(xiàng)目計(jì)劃書(shū)系統(tǒng)狀態(tài)
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
NSFC-UNEP（與聯(lián)合國(guó)環(huán)境規(guī)劃署）合作項(xiàng)目
已經(jīng)有33人回復(fù)
-
和伊朗人合作
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
江蘇省自然基金
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
生命科學(xué)新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 過(guò)氧化氫酶CAT的測(cè)定問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 黃孢子原毛平革菌木素過(guò)氧化物酶，錳過(guò)氧化物酶，漆酶酶活測(cè)定
已經(jīng)有58人回復(fù)
- 關(guān)于雙氧水濃度測(cè)定出現(xiàn)的問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- ELISA測(cè)定中，溫育過(guò)程中酶孔板（帶有液體）能與恒溫培養(yǎng)箱中的空氣接觸嗎？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助】過(guò)氧化氫（H2O2）的 測(cè)定方法
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【原創(chuàng)】非變性凝膠電泳原理及應(yīng)用實(shí)例
已經(jīng)有48人回復(fù)
- 【求助】植物葉片中過(guò)氧化氫酶測(cè)定的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助】請(qǐng)問(wèn)如何用分光光度法測(cè)過(guò)氧化氫濃度 。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】葡萄糖氧化酶酶活的測(cè)定方法
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】【土壤酶】高錳酸鉀滴定法測(cè)過(guò)氧化氫酶中的T
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助】過(guò)氧化氫含量測(cè)定
已經(jīng)有7人回復(fù)
senlinpeiyu
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 138.5
- 散金: 28
- 紅花: 1
- 帖子: 125
- 在線: 43.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1940038
- 注冊(cè): 2012-08-15
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 森林培育學(xué)
8樓2013-01-26 11:20:29
starseacow
專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +426 - APEPI: 64
- 應(yīng)助: 1217 (講師)
- 金幣: 9097.3
- 散金: 16445
- 紅花: 226
- 帖子: 4669
- 在線: 2320.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1136974
- 注冊(cè): 2010-11-02
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化
- 管轄: 動(dòng)植物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
senlinpeiyu: 金幣+1, ★有幫助, 我又磨了一批樣，離心出來(lái)了，又測(cè)定了一次，還是不可以，步驟還是同樣的步驟。 2013-01-23 19:08:58
xy656691: 金幣+2, 感謝積極應(yīng)助 2013-01-23 19:50:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
senlinpeiyu: 金幣+1, ★有幫助, 我又磨了一批樣，離心出來(lái)了，又測(cè)定了一次，還是不可以，步驟還是同樣的步驟。 2013-01-23 19:08:58
xy656691: 金幣+2, 感謝積極應(yīng)助 2013-01-23 19:50:02
|
我以前也是用這種方法測(cè)CAT，該方法用于山茶應(yīng)該也沒(méi)有問(wèn)題。你可以試試如下幾條： 1 反應(yīng)液檢測(cè)前現(xiàn)用現(xiàn)配，加大H2O2用量試試（H2O2一般不會(huì)有什么問(wèn)題，我以前都是放4度冰箱保存，但為了保險(xiǎn)起見(jiàn)，重新買(mǎi)一瓶用吧） 2 加大樣品用量，試試100 或200微升 3 你手頭有沒(méi)有商品過(guò)氧化氫酶，配一點(diǎn)過(guò)氧化氫酶溶液，用你的方法測(cè)一下，看吸光度如何變化。 |
2樓2013-01-23 17:32:25
xy656691
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- APEPI: 1
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.248
- 金幣: 1404.8
- 散金: 772
- 紅花: 12
- 帖子: 751
- 在線: 158.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1681902
- 注冊(cè): 2012-03-11
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 免疫學(xué)研究新技術(shù)與新方法
3樓2013-01-24 20:56:54
senlinpeiyu
銅蟲(chóng) (小有名氣)
 |
4樓2013-01-25 21:52:47
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | Micky11223 2026-03-25 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | Sanmu-124 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +6 | 墨墨漠 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211，335分，0856，求調(diào)劑院校和導(dǎo)師 +4 | 傾____蕭 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | wysyjs25 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院-光纖傳感課題組招生-中國(guó)科學(xué)院大學(xué)、深圳理工大學(xué)聯(lián)培 +5 | YangTyu1 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +9 | Mr. Z 2026-03-25 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | QiMing7 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +7 | 天天好運(yùn)來(lái)上岸?/a> 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +10 | 紙魚(yú)ly 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 280分求調(diào)劑 一志愿085802 +4 | PUMPT 2026-03-22 | 7/350 |
|