 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3391 | 回復(fù): 10 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
gaoyu_1984金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
rt-qpcr標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題
|
||
|
大家好，最近在做rt-qpcr，用了很久的標(biāo)曲RNA樣品(最高濃度約為90ng/uL，稀釋5個(gè)梯度)，兩周之前一切正常，慢慢就開(kāi)始最低那個(gè)濃度梯度不能擴(kuò)增，后來(lái)迅速發(fā)展為倒數(shù)第二個(gè)也不能擴(kuò)增。標(biāo)曲只剩下了3個(gè)點(diǎn)。以為是RNA降解了，于是重新制作了標(biāo)樣，濃度約為300ng/uL，可最低兩個(gè)濃度還是不能正確有效擴(kuò)增，前面三個(gè)濃度CT分別約為（18.75，20.74, 24.54） 于是又考慮probe,primer，RNase free water污染等原因，重新取了primer和probe stock（開(kāi)封半年，-30度保存），還是一樣。然后又用了新kit，全部使用了帶濾膜的槍頭，可還是一樣。 kit: platimum quantitative rt-pcr thermoscript one-step system (invitrogen) 還請(qǐng)明白人指點(diǎn)一下那里可能出了問(wèn)題。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有227人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- RT-qPCR實(shí)驗(yàn)問(wèn)題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 原子吸收 標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 大家做RT-qPCR設(shè)計(jì)引物用的什么軟件呀？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴(kuò)增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點(diǎn)
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 蒽酮比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線的問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- ICP-MS測(cè)鉛-標(biāo)準(zhǔn)曲線的問(wèn)題？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 液相的標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- IQ5 RT-QPCR問(wèn)題求助
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 一個(gè)關(guān)于qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的問(wèn)題。謝謝！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光pcr標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- CO2/CO標(biāo)準(zhǔn)曲線制作問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- p-NPP法測(cè)定脂肪酶活性p-NP標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 幫我看看這個(gè)溶解qPCR曲線
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請(qǐng)教ICP標(biāo)準(zhǔn)曲線的問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 想問(wèn)一下關(guān)于rt-qPCR的問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 原子吸收 標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題。謝謝大家了。。
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】請(qǐng)教：液相 標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA的提取問(wèn)題和qRT-PCR分析基因在不同時(shí)間的定量表達(dá)
已經(jīng)有10人回復(fù)
lidonghong
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 116 (高中生)
- 金幣: 2071.8
- 散金: 21
- 紅花: 2
- 帖子: 403
- 在線: 167.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1098160
- 注冊(cè): 2010-09-14
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
7樓2013-01-29 08:45:07
wqj1988926
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 40 (小學(xué)生)
- 金幣: 1222
- 散金: 27
- 紅花: 5
- 帖子: 929
- 在線: 225.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1156883
- 注冊(cè): 2010-11-27
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問(wèn)題。 2013-01-28 19:58:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問(wèn)題。 2013-01-28 19:58:10
|
我個(gè)人不太理解樓主的實(shí)驗(yàn)，我說(shuō)下我個(gè)人做這方面實(shí)驗(yàn)的過(guò)程，希望有參考價(jià)值。 1. 采用絕對(duì)定量的方法的時(shí)候，做標(biāo)曲所采用的是標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒，10倍濃度稀釋 2. 相對(duì)定量的時(shí)候做標(biāo)曲所采用的標(biāo)準(zhǔn)品是反轉(zhuǎn)錄而成的cDNA，也是同樣稀釋。 樓主所采用的RNA來(lái)做標(biāo)曲，理論上也是可以的，但操作不好的話可能真的會(huì)講解。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
gaoyu_19842樓2013-01-28 16:40:23
lidonghong
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 116 (高中生)
- 金幣: 2071.8
- 散金: 21
- 紅花: 2
- 帖子: 403
- 在線: 167.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1098160
- 注冊(cè): 2010-09-14
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
rna濃度越低越容易降解，這是一方面 另一方面認(rèn)真回憶回憶你的實(shí)驗(yàn)操作步驟，和第一次成功的那次比對(duì)下 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2013-01-28 17:33:58
gaoyu_1984
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1339.3
- 帖子: 259
- 在線: 49小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 589040
- 注冊(cè): 2008-08-29
- 專(zhuān)業(yè): 環(huán)境工程
4樓2013-01-29 08:22:48
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +7 | 大饞小子 2026-03-28 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +4 | 冬十三 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 數(shù)一英一271專(zhuān)碩（085401）求調(diào)劑，可跨 +4 | 前行必有光 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 壓國(guó)家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +4 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | Micky11223 2026-03-25 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑323材料與化工 +7 | 1124361 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 085602 289分求調(diào)劑
+8
|
WWW西西弗斯 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥292求調(diào)劑 +6 | 小小陳小小 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +15 | Zhao anqi 2026-03-22 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | wcq131415 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 上海電力大學(xué)材料防護(hù)與新材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收調(diào)劑研究生（材料、化學(xué)、電化學(xué)，環(huán)境） +4 | 我愛(ài)學(xué)電池 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大化學(xué)322求調(diào)劑 +4 | 17501029541 2026-03-23 | 6/300 |
|