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gaojuan1985新蟲 (正式寫手)
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[求助]
關于細菌基因文庫的建立及酶的篩選，新手，請各位指教！
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大家好！ 我手頭有一個細菌，是從土壤中篩選出來的，能分泌我所需要的酶。該細菌我進行了16S rDNA測序，發(fā)現(xiàn)目前還沒有它的全基因組序列。但是我想得到我的酶的基因信息，因此想通過基因文庫的方法。但是本人新手，看了一些資料，有很多問題不明，特此請教： 1：基因組DNA的處理：有的用Sau 3AI進行部分酶切，有的用物理方法進行斷裂，還有其它限制性內(nèi)切酶處理等。我根據(jù)經(jīng)驗推測我的目的基因ORF大概在2 kb左右，因此，我該把基因組DNA切到多大比較合適？各位可否給個protocol？切多久？酶量？等等 2：載體的選擇：目前手頭只有質(zhì)粒，所以想先嘗試一下質(zhì)粒，fosmid和cosmid往后排，呵呵。那么質(zhì)粒該選用哪種？我看有用pUC18的，也有用pET系列的。各有何優(yōu)缺點呢？ 3：重組克隆的計數(shù)：弱弱地問一下，1萬個克隆的話，怎么計算出來的？難道一個一個數(shù)出來的？還有，怎么保存這些重組克隆呢？ 問題較多，請多賜教。金幣有限，但是與大家交流溝通的心無限，呵呵，謝謝啦  |
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