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gaojuan1985新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
關(guān)于細(xì)菌基因文庫(kù)的建立及酶的篩選，新手，請(qǐng)各位指教！
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大家好！ 我手頭有一個(gè)細(xì)菌，是從土壤中篩選出來(lái)的，能分泌我所需要的酶。該細(xì)菌我進(jìn)行了16S rDNA測(cè)序，發(fā)現(xiàn)目前還沒(méi)有它的全基因組序列。但是我想得到我的酶的基因信息，因此想通過(guò)基因文庫(kù)的方法。但是本人新手，看了一些資料，有很多問(wèn)題不明，特此請(qǐng)教： 1：基因組DNA的處理：有的用Sau 3AI進(jìn)行部分酶切，有的用物理方法進(jìn)行斷裂，還有其它限制性?xún)?nèi)切酶處理等。我根據(jù)經(jīng)驗(yàn)推測(cè)我的目的基因ORF大概在2 kb左右，因此，我該把基因組DNA切到多大比較合適？各位可否給個(gè)protocol？切多久？酶量？等等 2：載體的選擇：目前手頭只有質(zhì)粒，所以想先嘗試一下質(zhì)粒，fosmid和cosmid往后排，呵呵。那么質(zhì)粒該選用哪種？我看有用pUC18的，也有用pET系列的。各有何優(yōu)缺點(diǎn)呢？ 3：重組克隆的計(jì)數(shù)：弱弱地問(wèn)一下，1萬(wàn)個(gè)克隆的話(huà)，怎么計(jì)算出來(lái)的？難道一個(gè)一個(gè)數(shù)出來(lái)的？還有，怎么保存這些重組克隆呢？ 問(wèn)題較多，請(qǐng)多賜教。金幣有限，但是與大家交流溝通的心無(wú)限，呵呵，謝謝啦  |
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gaojuan1985
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gaojuan1985
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5樓2013-03-01 13:27:03
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