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duoduozuo

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[求助] 用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定菌液中細(xì)菌總蛋白濃度，需要對(duì)菌液進(jìn)行怎樣的預(yù)處理

用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定菌液中細(xì)菌總蛋白濃度，需要對(duì)細(xì)菌細(xì)菌進(jìn)行怎樣的預(yù)處理才能去測(cè)定？需要先將細(xì)菌從培養(yǎng)基中離心出來(lái)再置于緩沖液中再用超聲波破碎么？還是新手，希望各位大牛指導(dǎo)。先謝啦！

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1樓 2013-02-26 20:20:19

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duoduozuo

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2樓: Originally posted by lpl0032 at 2013-02-26 22:10:18
對(duì)的！離心收集菌體，冰浴破碎一般一個(gè)小時(shí)，超高速離心，取上清液

謝謝啦！

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4樓2013-02-27 09:46:02

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zhang8826857: 金幣+1, 手機(jī)回帖，給力 2013-02-28 23:48:54

對(duì)的！離心收集菌體，冰浴破碎一般一個(gè)小時(shí)，超高速離心，取上清液

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2樓2013-02-26 22:10:18

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laozuzunzhe

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【答案】應(yīng)助回帖

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zhang8826857: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2013-02-28 23:49:03

我們超聲破碎大概5min，這個(gè)條件需要自己摸索，感覺(jué)一小時(shí)可能太長(zhǎng)了。
先離心分理處菌，再用緩沖液清洗一次；
在緩沖液或水中破碎都可以；
破碎后所得上清中蛋白是水溶性的；
不溶的蛋白在沉淀中。

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3樓2013-02-27 09:40:06

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引用回帖:

3樓: Originally posted by laozuzunzhe at 2013-02-27 09:40:06
我們超聲破碎大概5min，這個(gè)條件需要自己摸索，感覺(jué)一小時(shí)可能太長(zhǎng)了。
先離心分理處菌，再用緩沖液清洗一次；
在緩沖液或水中破碎都可以；
破碎后所得上清中蛋白是水溶性的；
不溶的蛋白在沉淀中。

需要的是細(xì)菌的總蛋白，那也需要將沉淀當(dāng)中的蛋白算在內(nèi)吧？怎么樣進(jìn)行后續(xù)處理才能去測(cè)定呢？剛開(kāi)始接觸這個(gè)，什么都還不懂，希望您能不吝賜教。謝謝了

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5樓2013-02-27 09:49:49

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