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[求助]
蛋白純化的高手指點(diǎn)呀,陽(yáng)離子交換層析的條件選擇
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| 我需要純化的目的蛋白等電點(diǎn)為9.0,想用CM Sepharose F F柱純化,之前的師兄用的是0-1M NaCL的50mM,pH 4.5 的NaAC的緩沖液線性梯度洗脫,可是我看群里討論的多數(shù)使用磷酸鹽緩沖液,想問(wèn)問(wèn)這兩種不同的緩沖液有什么區(qū)別呢?是不是分離蛋白的效果不同呀! |

金蟲 (職業(yè)作家)
新蟲 (正式寫手)
| 你的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)是9.0,而你要用4.5的緩沖液,相差這么多,你不怕你的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定嗎?一般來(lái)說(shuō),離子交換的時(shí)候,偏離開等電點(diǎn)1-2個(gè)pH就足夠了,pH相差越大,蛋白質(zhì)反而不穩(wěn)定。因此,建議你嘗試pH7.0的緩沖液,Tirs-HCl、磷酸鹽緩沖液或者HEPES,都可以。 |
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