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蛋白純化的高手指點(diǎn)呀，陽離子交換層析的條件選擇
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| 我需要純化的目的蛋白等電點(diǎn)為9.0，想用CM Sepharose F F柱純化，之前的師兄用的是0-1M NaCL的50mM，pH 4.5 的NaAC的緩沖液線性梯度洗脫，可是我看群里討論的多數(shù)使用磷酸鹽緩沖液，想問問這兩種不同的緩沖液有什么區(qū)別呢？是不是分離蛋白的效果不同呀！ |
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lihuan0525
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2樓2013-02-27 13:15:06
gaojuan1985
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 你的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)是9.0，而你要用4.5的緩沖液，相差這么多，你不怕你的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定嗎？一般來說，離子交換的時(shí)候，偏離開等電點(diǎn)1-2個(gè)pH就足夠了，pH相差越大，蛋白質(zhì)反而不穩(wěn)定。因此，建議你嘗試pH7.0的緩沖液，Tirs-HCl、磷酸鹽緩沖液或者HEPES，都可以。 |
3樓2013-02-27 13:50:00
4樓2013-02-28 01:11:17
gaojuan1985
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-02-28 10:40:03
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-02-28 10:40:03
| 你的蛋白等電點(diǎn)不是9.0嗎？難道是你寫錯(cuò)了或者我看錯(cuò)了？總之是采用的緩沖液最好不要超過等電點(diǎn)太遠(yuǎn)，否則蛋白質(zhì)是不穩(wěn)定的，一般來說，我都用偏離1.5左右，如果要確保離子交換能吸附上，那么兩個(gè)pH的偏差也足夠了。如果PI=9.0，而你用pH=4.5的話，第一是蛋白不一定穩(wěn)定（只是不一定，具體是不是這樣因蛋白而論），第二，在離子交換上吸附太牢固，不容易洗脫下來。而且會(huì)有更多的雜質(zhì)吸附上去，不合算。 |
5樓2013-02-28 08:39:07
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10樓2015-12-22 13:27:14
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