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[求助]
蛋白純化的高手指點(diǎn)呀，陽(yáng)離子交換層析的條件選擇
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| 我需要純化的目的蛋白等電點(diǎn)為9.0，想用CM Sepharose F F柱純化，之前的師兄用的是0-1M NaCL的50mM，pH 4.5 的NaAC的緩沖液線性梯度洗脫，可是我看群里討論的多數(shù)使用磷酸鹽緩沖液，想問(wèn)問(wèn)這兩種不同的緩沖液有什么區(qū)別呢？是不是分離蛋白的效果不同呀！ |
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9樓2013-03-04 09:23:37
lihuan0525
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2樓2013-02-27 13:15:06
gaojuan1985
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yuanalice: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-02-28 01:11:35
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| 你的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)是9.0，而你要用4.5的緩沖液，相差這么多，你不怕你的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定嗎？一般來(lái)說(shuō)，離子交換的時(shí)候，偏離開(kāi)等電點(diǎn)1-2個(gè)pH就足夠了，pH相差越大，蛋白質(zhì)反而不穩(wěn)定。因此，建議你嘗試pH7.0的緩沖液，Tirs-HCl、磷酸鹽緩沖液或者HEPES，都可以。 |
3樓2013-02-27 13:50:00
4樓2013-02-28 01:11:17
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