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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 雙熒光素酶報告實驗
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LiJie861027新蟲 (初入文壇)
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[求助]
雙熒光素酶報告實驗
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| 雙熒光素酶報告實驗是怎么回事情？ |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
LiJie861027: 金幣+1, ★★★很有幫助 2013-03-13 15:34:21
感謝參與，應助指數(shù) +1
LiJie861027: 金幣+1, ★★★很有幫助 2013-03-13 15:34:21
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簡單的說，這個實驗系統(tǒng)可以研究基因調(diào)控，或者說啟動子活性�；蚝螘r ON/OFF？其行使功能的效率如何？基因可以被某個藥物switched ON/OFF? 這個系統(tǒng)里一般有兩個載體，一個載體上有螢火蟲熒光素酶Firefly luciferase基因，這個載體一般會連接上你想要檢測的基因或者說啟動子；另外一個載體上有海腎熒光素酶Renilla luciferase基因，一般這個載體上還連接有超強啟動子，作為內(nèi)對照基因，默認這個載體的表達水平也就是海腎熒光素酶基因的表達水平在所有細胞，或者細胞在不同的環(huán)境下，都是一樣的。這個就是螢火蟲熒光素酶-海腎熒光素酶雙報告基因檢測方法，PROMEGA和一些國產(chǎn)的廠家都已經(jīng)有這個試劑盒。另外，現(xiàn)在應該還有其他的熒光素酶系統(tǒng)可以選擇。 實驗步驟大概是： 1.先加入Luciferin檢測Firefly luciferase 活性(經(jīng)2s延遲后讀數(shù))。 2.加入Stop&Glo終止Firefly 反應，同時開始檢測Renilla luciferase 活性(經(jīng)2s延遲后讀數(shù)) 。 3.實驗的結果以Firefly和Renilla活性的比值來衡量。 這個實驗需要用可以檢測化學發(fā)光的儀器來做。因為化學發(fā)光的信號比較微弱和不穩(wěn)定，所以這個實驗一定要做好各種對照！ |
2樓2013-03-12 20:47:11
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