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LiJie861027新蟲(chóng) (初入文壇)
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雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
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| 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)是怎么回事情？ |
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phhcrab
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
LiJie861027: 金幣+1, ★★★很有幫助 2013-03-13 15:34:21
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簡(jiǎn)單的說(shuō)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可以研究基因調(diào)控，或者說(shuō)啟動(dòng)子活性�；蚝螘r(shí) ON/OFF？其行使功能的效率如何？基因可以被某個(gè)藥物switched ON/OFF? 這個(gè)系統(tǒng)里一般有兩個(gè)載體，一個(gè)載體上有螢火蟲(chóng)熒光素酶Firefly luciferase基因，這個(gè)載體一般會(huì)連接上你想要檢測(cè)的基因或者說(shuō)啟動(dòng)子；另外一個(gè)載體上有海腎熒光素酶Renilla luciferase基因，一般這個(gè)載體上還連接有超強(qiáng)啟動(dòng)子，作為內(nèi)對(duì)照基因，默認(rèn)這個(gè)載體的表達(dá)水平也就是海腎熒光素酶基因的表達(dá)水平在所有細(xì)胞，或者細(xì)胞在不同的環(huán)境下，都是一樣的。這個(gè)就是螢火蟲(chóng)熒光素酶-海腎熒光素酶雙報(bào)告基因檢測(cè)方法，PROMEGA和一些國(guó)產(chǎn)的廠家都已經(jīng)有這個(gè)試劑盒。另外，現(xiàn)在應(yīng)該還有其他的熒光素酶系統(tǒng)可以選擇。 實(shí)驗(yàn)步驟大概是： 1.先加入Luciferin檢測(cè)Firefly luciferase 活性(經(jīng)2s延遲后讀數(shù))。 2.加入Stop&Glo終止Firefly 反應(yīng)，同時(shí)開(kāi)始檢測(cè)Renilla luciferase 活性(經(jīng)2s延遲后讀數(shù)) 。 3.實(shí)驗(yàn)的結(jié)果以Firefly和Renilla活性的比值來(lái)衡量。 這個(gè)實(shí)驗(yàn)需要用可以檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器來(lái)做。因?yàn)榛瘜W(xué)發(fā)光的信號(hào)比較微弱和不穩(wěn)定，所以這個(gè)實(shí)驗(yàn)一定要做好各種對(duì)照！ |
2樓2013-03-12 20:47:11
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