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putine

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[求助] Western blot結(jié)果分析

如圖所示，N為未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞裂解液，A和C分別是帶flag標(biāo)簽的兩個(gè)蛋白（其實(shí)是一個(gè)基因的兩個(gè)異構(gòu)體，所以相差不大）。flag標(biāo)簽在N端。圖片中所用抗體為Anti-flag M2�？梢�(jiàn)A有明顯條帶而c只有兩個(gè)點(diǎn)，如果看actin的結(jié)果的話上樣量基本一致，各位覺(jué)得可能是什么原因?qū)е碌囊粠б稽c(diǎn)呢？是轉(zhuǎn)染效率的問(wèn)題嗎？

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1樓 2013-03-21 21:07:10

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putine

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引用回帖:

4樓: Originally posted by 一步一步 at 2013-03-22 12:24:58
都是N-端Flag標(biāo)簽蛋白的話，結(jié)果應(yīng)該是很相似的才對(duì)。建議樓主再次重復(fù)一下試驗(yàn)。。

謝謝正在重復(fù)實(shí)驗(yàn)。發(fā)帖的時(shí)候有點(diǎn)急，有些部分沒(méi)有說(shuō)清楚，同一塊膠上還雜了另外一個(gè)抗體，結(jié)果還是一樣的，A是帶，C是點(diǎn)。所以我才覺(jué)得是轉(zhuǎn)染效率的問(wèn)題

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5樓2013-03-22 22:14:35

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cicelyzh

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wizardfan: 金幣+1, 謝謝分析 2013-03-22 07:38:54
putine: 金幣+1, ★有幫助 2013-03-22 22:12:17

感覺(jué)是你轉(zhuǎn)膜的時(shí)候膠沒(méi)放正，C樣品下面轉(zhuǎn)出去了。

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2樓2013-03-22 01:44:02

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tigertang

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★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
putine: 金幣+1, ★有幫助 2013-03-22 22:12:25

看C，兩邊有點(diǎn)，感覺(jué)像有帶，估計(jì)是轉(zhuǎn)膜的問(wèn)題。把原來(lái)的樣品再跑一塊膠，一切就見(jiàn)分曉。

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3樓2013-03-22 11:11:15

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一步一步

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putine: 金幣+18, ★有幫助 2013-03-22 22:12:31

都是N-端Flag標(biāo)簽蛋白的話，結(jié)果應(yīng)該是很相似的才對(duì)。建議樓主再次重復(fù)一下試驗(yàn)。。

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4樓2013-03-22 12:24:58

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