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[求助] 膠回收總是不成功求指點�。�！

PCR產(chǎn)物點3ul樣品電泳后1000bp條帶還可以雖然不很亮但是還可以想做膠回收用大孔膠點40ul電泳之后 1000bp條帶很淺很淺�。�！無法膠回收！��！求人指點！很捉急

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1樓 2013-03-22 11:00:19

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yoyo單眼皮: 金幣+1 2013-03-23 11:31:48

PCR產(chǎn)物是一條帶的話一般不用切膠回收，直接用PCR產(chǎn)物純化回收就可以了。

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2樓2013-03-22 12:37:13

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:37:13
PCR產(chǎn)物是一條帶的話一般不用切膠回收，直接用PCR產(chǎn)物純化回收就可以了。

可是我不是單一條帶

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3樓2013-03-22 12:48:05

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4樓2013-03-22 15:38:30

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cicelyzh

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yoyo單眼皮: 金幣+1, ★有幫助 2013-03-23 11:31:13

引用回帖:

3樓: Originally posted by yoyo單眼皮 at 2013-03-22 12:48:05
可是我不是單一條帶...

先優(yōu)化一下PCR的條件，實在不行的話多P幾管。做回收膠的時候最好也跑一下marker，可以估算一下產(chǎn)物大致的量。

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5樓2013-03-23 00:36:15

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yoyo單眼皮: 金幣+2 2013-03-23 11:31:38

pcr條帶很暗，marker亮度正常的話，就重新P吧……一般優(yōu)化一下體系，還有希望的。
但是你說條帶又暗，還不是單一條帶，是不是引物設計得不好？

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6樓2013-03-23 09:16:48

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yoyo單眼皮

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引用回帖:

4樓: Originally posted by zr281069 at 2013-03-22 15:38:30
加大模板量試試估計是體系的問題

7樓2013-03-23 11:31:27

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wchuangqi

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建議做一個溫度梯度PCR，優(yōu)化一下PCR條件再做。要是不行的話，我覺得就直接再設計引物

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8樓2013-03-24 15:22:16

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如果以上嘗試過后，還不能得到足夠亮的條帶，可以用回收后的產(chǎn)物做為模板，再用原先優(yōu)化過的PCR體系，再多P幾管，再次回收，這樣的話，特異性和亮度都會有保證，就是突變的幾率會高一點，建議使用保真性好的聚合酶來擴增。

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9樓2013-03-25 21:10:00

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yoyo單眼皮: 金幣+6, ★★★很有幫助 2013-03-26 20:34:50

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10樓2013-03-25 21:55:38

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