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hsd3521

[交流] 色譜柱柱壓異常高，嘗試了多種辦法，請(qǐng)教高人

柱子型號(hào)：Jupiter C4 reversed phase column (250 mm × 4.6 mm, 300 -sized pores, 5-μm sized particles)
進(jìn)樣：植物蛋白粗提液，過(guò)0.45膜
流動(dòng)相：70%水30%乙腈，結(jié)束試驗(yàn)后用100%乙腈沖洗
問(wèn)題：用了兩三天后，柱壓奇高，達(dá)到220左右，用100%乙腈沖洗，柱壓正常，在45-48之間
采取措施：超聲篩板，無(wú)用；反相沖洗，無(wú)用；低流速5%甲醇沖洗兩天后，采用流動(dòng)相仍在190左右
所以，在此請(qǐng)高人指點(diǎn)，如果操作，為什么100%乙腈沖洗時(shí)正常，柱子真得堵了嗎？
附件是我在網(wǎng)上搜集的液相色譜柱的清洗與再生方法，感謝大家，在此分享[ Last edited by hsd3521 on 2013-3-26 at 07:53 ]

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附件 1 : 高效液相色譜柱清洗與再生方法.pdf

2013-03-26 07:53:31, 966.76 K

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1樓 2013-03-24 09:06:25

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hsd3521

主管區(qū)長(zhǎng) (知名作家)

引用回帖:

6樓: Originally posted by codyliu at 2013-03-24 15:06:47
一般已經(jīng)過(guò)了0.45的膜了就不應(yīng)該是樣品堵了柱子，但是如果用這個(gè)比例洗脫一直有問(wèn)題的話可以考慮換一下比例，還有，我認(rèn)為你檢查一下是不是有人用它做過(guò)別的，他們是不是有殘留，我就遇到過(guò)在檢測(cè)池那里出現(xiàn)殘留的問(wèn) ...

謝謝您的回復(fù)
儀器安捷倫1100 到220的時(shí)候就容易出現(xiàn)蹦柱頭的危險(xiǎn)情況了
檢測(cè)池應(yīng)該沒(méi)什么問(wèn)題

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9樓2013-03-25 07:57:58

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heyo_123

至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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蟲(chóng)號(hào): 810494

★
crity328: 金幣+1, 感謝交流，歡迎常來(lái)~ 2013-03-24 14:53:08

讓我猜一下，沒(méi)測(cè)過(guò)蛋白，但可能是如下原因：
1.你所分析的蛋白，在乙腈中溶解性好，但在水中，可能會(huì)析出，在你現(xiàn)在的色譜條件下，使用時(shí)間長(zhǎng)，肯定會(huì)堵柱。
建議接一個(gè)保護(hù)柱。
測(cè)試你的樣品的溶解性，溶于水嗎？
柱壓高？真是柱的原因嗎？取下柱子，看看柱壓。
再說(shuō)低流速的甲醇水，5% 也有點(diǎn)太低了吧？雖然你的柱可以用水沖，但還是有機(jī)相比例高些好點(diǎn)吧...

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2樓2013-03-24 10:55:46

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huang19880

銅蟲(chóng) (初入文壇)

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在線: 30.5小時(shí)
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可以一個(gè)個(gè)模塊拆，排除看看是連上哪個(gè)模塊壓力大。如果柱溫箱柱子前接口不連接，壓力正常，連上柱子（柱后未連未連接檢測(cè)器）壓力就大了這樣就是柱子問(wèn)題了。

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4樓2013-03-24 11:13:28

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sjzhang156

銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 77 (初中生)
金幣: 2082.8
帖子: 1033
在線: 197.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 995395

乙腈壓縮系數(shù)小，純乙腈當(dāng)然壓力小了，你比前后的壓力應(yīng)該是一個(gè)流動(dòng)相比列，100%水和100%乙腈差別當(dāng)然大了

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5樓2013-03-24 14:52:04

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