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Xsonglin金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于帶卡那抗性的重組大腸桿菌
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| 帶卡那抗性的重組大腸桿菌,做4.5噸發(fā)酵罐中試,在發(fā)酵前期取樣涂含卡那的LB平板,長(zhǎng)的菌落數(shù)和無(wú)卡那的LB平板相近,菌體基本都帶卡那抗性。但是發(fā)酵12小時(shí)(IPTG誘導(dǎo)后1小時(shí)),取樣涂卡那平板,一個(gè)菌落也不長(zhǎng),無(wú)卡那的LB平板還是正常的。而此時(shí),產(chǎn)物還是有表達(dá)的。不知是什么原因? |
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
| 不知道你發(fā)酵罐里加沒(méi)加抗生素呢?質(zhì)粒在沒(méi)有選擇壓力情況下是容易丟失的,特別是發(fā)酵罐條件下,菌體復(fù)制速度快,更易發(fā)生質(zhì)粒丟失。至于產(chǎn)物表達(dá)的問(wèn)題,不知道你有沒(méi)有設(shè)立負(fù)對(duì)照及表達(dá)量如何,因?yàn)楹芏噘|(zhì)粒的啟動(dòng)子是不嚴(yán)謹(jǐn)?shù),即不誘導(dǎo)也有本地表達(dá),在菌體密度很大的情況下,有可能觀察到目的蛋白的表達(dá)。 |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
我們是糖 甜到憂傷

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