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Xsonglin金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于帶卡那抗性的重組大腸桿菌
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| 帶卡那抗性的重組大腸桿菌，做4.5噸發(fā)酵罐中試，在發(fā)酵前期取樣涂含卡那的LB平板，長(zhǎng)的菌落數(shù)和無卡那的LB平板相近，菌體基本都帶卡那抗性。但是發(fā)酵12小時(shí)（IPTG誘導(dǎo)后1小時(shí)），取樣涂卡那平板，一個(gè)菌落也不長(zhǎng)，無卡那的LB平板還是正常的。而此時(shí)，產(chǎn)物還是有表達(dá)的。不知是什么原因？ |
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qqxs
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Xsonglin(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-04-27 14:23:07
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| 不知道你發(fā)酵罐里加沒加抗生素呢？質(zhì)粒在沒有選擇壓力情況下是容易丟失的，特別是發(fā)酵罐條件下，菌體復(fù)制速度快，更易發(fā)生質(zhì)粒丟失。至于產(chǎn)物表達(dá)的問題，不知道你有沒有設(shè)立負(fù)對(duì)照及表達(dá)量如何，因?yàn)楹芏噘|(zhì)粒的啟動(dòng)子是不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)�，即不誘導(dǎo)也有本地表達(dá)，在菌體密度很大的情況下，有可能觀察到目的蛋白的表達(dá)。 |
3樓2013-03-25 12:06:42
mao877516786
銅蟲 (正式寫手)
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2樓2013-03-25 09:51:57
susizheng
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4樓2013-03-25 15:37:49
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