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夕西溪新蟲 (初入文壇)
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淋巴細(xì)胞培養(yǎng)
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打算分離淋巴細(xì)胞觀察它對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)�？戳宋墨I(xiàn)，有幾個(gè)不懂的地反： 假若要提cd4+T細(xì)胞，那么用磁珠從PBMC中分選出來(lái)的T細(xì)胞是否是未活化的， （1）所以，做殺傷實(shí)驗(yàn)的時(shí)候要加anti-CD3/anti-CD28 beads，IL-2？原理是什么？ （2）anti-CD3/anti-CD28 beads 是否可以用其它試劑代替 （3）irradiated feeder cells究竟是什么？是把它加到分選出來(lái)的T細(xì)胞里面一起培養(yǎng)么？那么不久混起來(lái)了？ （4）如果只做急性的實(shí)驗(yàn)，不要穩(wěn)定傳代的T細(xì)胞，是否可以略去上面步驟？ 非常感謝！！別嫌我吝嗇啊，只有兩個(gè)金幣，全部懸賞…… |
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2樓2013-04-18 15:21:06
陽(yáng)光下的劉小貓
新蟲 (初入文壇)
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致T細(xì)胞增殖和活化的下游信號(hào)的激活，從而使T細(xì)胞增殖和活化。也就是說(shuō)，CD3激發(fā)型單抗能 夠模擬抗原與TCR/CD3復(fù)合物的識(shí)別和激活過(guò)程，從而引起T細(xì)胞的增殖與活化，因此是CIK細(xì)胞培養(yǎng)中不可或缺的刺激因素。? ? ?? ???此外，CD3激發(fā)型單抗在選用時(shí)一定要注意克隆號(hào)。研究表明，僅克隆號(hào)為OKT-3的CD3激發(fā)型單抗可以刺激所有人的T細(xì)胞的增殖，而其它克隆號(hào)的CD3激發(fā)型單抗僅能刺激一部分人的T細(xì)胞。因此，在進(jìn)行CIK培養(yǎng)時(shí)，最好選用OKT-3克隆，以保證每個(gè)患者的T細(xì)胞均能被激活。 ? ?? ?? ?IL-2 (白細(xì)胞介素-2) ? ?? ???IL-2最初發(fā)現(xiàn)時(shí)被稱為T細(xì)胞生長(zhǎng)因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T細(xì)胞增殖最重要的細(xì)胞因 子。IL-2既是自分泌細(xì)胞因子，也是旁分泌細(xì)胞因子，其通過(guò)與T細(xì)胞表面的IL-2受體(IL-2R)的特異性結(jié)合而促使T細(xì)胞活化，并進(jìn)入細(xì)胞分裂狀態(tài)。此外，IL-2還可刺激NK細(xì)胞的生長(zhǎng)并增強(qiáng)其殺傷能力。因此CIK 細(xì)胞培養(yǎng)中須添加IL-2，以促進(jìn)T細(xì)胞的增殖與活化。 ? ?? ?? ?IFN-y(干擾素-y) ? ?? ???IFN-y;具有上調(diào)外周血淋巴細(xì)胞表面IL-2R表達(dá)的作用，因此會(huì)增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)IL-2促增殖反應(yīng)的敏感度和 強(qiáng)度。在誘導(dǎo)CIK細(xì)胞形成的過(guò)程中加入IFN-? ，可降低IL-2的用量。研究發(fā)現(xiàn)，IFN-y加入的順序與CIK的 細(xì)胞毒活性密切相關(guān)。先加入IFN-y，培養(yǎng)24后再加入IL-2，可明顯提高CIK的細(xì)胞毒活性。第二個(gè)問(wèn)題的答案。  發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-05-24 00:36:01
陽(yáng)光下的劉小貓
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? ?? ???CD3激發(fā)型單抗： ? ?? ? T細(xì)胞活化的第一信號(hào)來(lái)自于T細(xì)胞表面的受體，即T細(xì)胞抗原受體(T cell antigen receptor, TCR)與APC提呈的抗原的特異性結(jié)合，也就是T細(xì)胞對(duì)抗原的特異性識(shí)別。TCR是由2條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體，在T細(xì)胞表面，其與CD3分子通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合，形成TCR/CD3復(fù)合體。TCR識(shí)別特異性抗原后會(huì)引起CD3和T細(xì)胞表面的輔助受體CD4或CD8分子的胞漿尾部聚集，進(jìn)而激活與胞漿尾部相連的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞漿區(qū)的免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)進(jìn)一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，從而引起激酶活化的級(jí)聯(lián)反應(yīng)(磷脂酰肌醇途徑或MAP激酶途徑等)，最終通過(guò)激活轉(zhuǎn)錄因子，使其進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合于調(diào)控T細(xì)胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-?等)，引起基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄，T細(xì)胞因而由靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)為增殖和活化狀態(tài)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-05-24 00:37:27
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