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淋巴細胞培養(yǎng)
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打算分離淋巴細胞觀察它對腫瘤細胞的殺傷實驗。看了文獻，有幾個不懂的地反： 假若要提cd4+T細胞，那么用磁珠從PBMC中分選出來的T細胞是否是未活化的， （1）所以，做殺傷實驗的時候要加anti-CD3/anti-CD28 beads，IL-2？原理是什么？ （2）anti-CD3/anti-CD28 beads 是否可以用其它試劑代替 （3）irradiated feeder cells究竟是什么？是把它加到分選出來的T細胞里面一起培養(yǎng)么？那么不久混起來了？ （4）如果只做急性的實驗，不要穩(wěn)定傳代的T細胞，是否可以略去上面步驟？ 非常感謝��！別嫌我吝嗇啊，只有兩個金幣，全部懸賞…… |
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? ?? ???CD3激發(fā)型單抗： ? ?? ? T細胞活化的第一信號來自于T細胞表面的受體，即T細胞抗原受體(T cell antigen receptor, TCR)與APC提呈的抗原的特異性結(jié)合，也就是T細胞對抗原的特異性識別。TCR是由2條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體，在T細胞表面，其與CD3分子通過非共價鍵結(jié)合，形成TCR/CD3復合體。TCR識別特異性抗原后會引起CD3和T細胞表面的輔助受體CD4或CD8分子的胞漿尾部聚集，進而激活與胞漿尾部相連的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞漿區(qū)的免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)進一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，從而引起激酶活化的級聯(lián)反應(磷脂酰肌醇途徑或MAP激酶途徑等)，最終通過激活轉(zhuǎn)錄因子，使其進入細胞核內(nèi)，結(jié)合于調(diào)控T細胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-?等)，引起基因的表達和轉(zhuǎn)錄，T細胞因而由靜止狀態(tài)轉(zhuǎn)為增殖和活化狀態(tài)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-05-24 00:37:27
2樓2013-04-18 15:21:06
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致T細胞增殖和活化的下游信號的激活，從而使T細胞增殖和活化。也就是說，CD3激發(fā)型單抗能 夠模擬抗原與TCR/CD3復合物的識別和激活過程，從而引起T細胞的增殖與活化，因此是CIK細胞培養(yǎng)中不可或缺的刺激因素。? ? ?? ???此外，CD3激發(fā)型單抗在選用時一定要注意克隆號。研究表明，僅克隆號為OKT-3的CD3激發(fā)型單抗可以刺激所有人的T細胞的增殖，而其它克隆號的CD3激發(fā)型單抗僅能刺激一部分人的T細胞。因此，在進行CIK培養(yǎng)時，最好選用OKT-3克隆，以保證每個患者的T細胞均能被激活。 ? ?? ?? ?IL-2 (白細胞介素-2) ? ?? ???IL-2最初發(fā)現(xiàn)時被稱為T細胞生長因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T細胞增殖最重要的細胞因 子。IL-2既是自分泌細胞因子，也是旁分泌細胞因子，其通過與T細胞表面的IL-2受體(IL-2R)的特異性結(jié)合而促使T細胞活化，并進入細胞分裂狀態(tài)。此外，IL-2還可刺激NK細胞的生長并增強其殺傷能力。因此CIK 細胞培養(yǎng)中須添加IL-2，以促進T細胞的增殖與活化。 ? ?? ?? ?IFN-y(干擾素-y) ? ?? ???IFN-y;具有上調(diào)外周血淋巴細胞表面IL-2R表達的作用，因此會增強T細胞對IL-2促增殖反應的敏感度和 強度。在誘導CIK細胞形成的過程中加入IFN-? ，可降低IL-2的用量。研究發(fā)現(xiàn)，IFN-y加入的順序與CIK的 細胞毒活性密切相關。先加入IFN-y，培養(yǎng)24后再加入IL-2，可明顯提高CIK的細胞毒活性。第二個問題的答案。  發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-05-24 00:36:01
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